免疫細胞化學Zambonis液與PLP液

  配制方法：稱取多聚甲醛20 g，加入飽和苦味酸150 ml，加熱至60 ℃左右，持續攪拌使充分溶解、過濾、冷卻后，加Karasson-Schwlt's PB至1000 ml充分混合（Karasson–Schwlt's磷酸緩沖液的配制配制方法見后）。

    該固定液適于電鏡免疫細胞化學，對超微結構的保存較純甲醛為優，也適于光鏡免疫細胞化學研究，為實驗室常用固定劑之一。我們在應用中，常采用2.5%的多聚甲醛和30%的飽和苦味酸，以增加其對組織的穿透力和固定效果，保存更多的組織抗原。固定時間為6～18 h。

    PLP液　　PLP液即過碘酸鹽-賴氨酸-多聚甲醛固定液（Periodate-Lysine-paraform-alde－hyde fixative）

試劑：過碘酸鈉、賴氨酸鹽酸鹽（或鹽酸賴氨酸）、多聚甲醛、蒸餾水。

配制方法：

（1）貯存液A（0.1 mol/L賴氨酸-0.5mol/L Na3PO4，pH7.4）：稱取賴氨酸鹽酸鹽1.827 g溶于50 ml蒸餾水中，得0.2 mol/L的賴氨酸鹽酸鹽溶液，然后加入Na2HPO4至0.1 mol/L，將pH調至7.4，補足0.1 mol/L的PB至100 ml，使賴氨酸濃度也為0.1 mol/L，4 ℃冰箱保存，兩周內使用。此溶液的滲透濃度為300 mOsmmol/L/kg。抗原

（2）貯存液B（8%多聚甲醛溶液）：稱8 g多聚甲醛加入100 ml蒸餾水中，配成8%多聚甲醛液（方法見前）。過濾后4 ℃冰箱保存。

（3）臨用前，以3份A液與1份B液混合，再加入結晶過碘酸鈉（NaIO4），使NaIO4終濃度為2%。由于AB兩液混合，pH從約7.5降至6.2，故固定時不需再調pH值。固定時間為6～18 h。

    該固定劑較適于富含糖類的組織，對超微結構及許多抗原的抗原性保存較好。其機制是借助于過碘酸氧化組織中的糖類形成醛基，通過賴氨酸的雙價氨基與醛基結合，從而與糖形成交聯。由于組織抗原絕大多數都是由蛋白質和糖兩部分構成，抗原決定簇位于蛋白部分，故該固定劑有選擇性地使糖類固定，這樣既穩定了抗原，又不影響其在組織中的位置關系。Mclean和Nakane等認為，zui佳的混合是：含0.01 mol/L的過碘酸鹽、0.075 mol/L的賴氨酸、2%的多聚甲醛及0.037 mol/L的磷酸緩沖液。