兔白細胞介素1（IL-1）定量檢測試劑盒（ELISA）
使用說明書
【試劑盒名稱】
兔白細胞介素1（IL-1）定量檢測試劑盒（ELISA）
【試劑盒用途】
定量檢測兔血清、血漿及相關液體樣本中白細胞介素1（IL-1）的含量。
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【檢測原理】
本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯免疫吸附法（ELISA）。將標準品、待測樣本加入到預先包被兔白細胞介素1（IL-1）抗體透明酶標包被板中，溫育足夠時間后，洗滌除去未結合的成分，再加入酶標工作液，溫育足夠時間后，洗滌除去未結合的成分。依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根過氧化物酶（HRP）催化下轉化為藍色產物，在酸的作用下變成黃色，顏色的深淺與樣品中兔白細胞介素1（IL-1）濃度呈正相關，450nm波長下測定OD值，根據標準品和樣品的OD值，計算樣本中兔白細胞介素1（IL-1）含量。
【試劑盒組成】
1 | 酶標包被板 | 12孔×8條 | 7 | 顯色劑B液 | 6mL |
2 | 標準品 | 0.3mL*6管 | 8 | 終止液 | 6mL |
3 | 20倍濃縮洗滌液 | 25mL | 9 | 說明書 | 1份 |
4 | 生物素 | 1mL | 10 | 封板膜 | 2張 |
5 | 酶標試劑 | 10mL | 11 | 密封袋 | 1個 |
6 | 顯色劑A液 | 6mL |
備注：標準品（S0→S5）濃度依次為：320、160、80、40、20、0ng/L.
【需要而未提供的試劑和器材】
1、37℃恒溫箱
2、標準規格酶標儀
3、精密移液器及一次性吸頭
4、蒸餾水
5、一次性試管
6、吸水紙
【操作步驟】
1、準備：從冰箱取出試劑盒，室溫復溫平衡30分鐘。
2、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。
3、設置加樣孔：取足夠數量的酶標包被板，固定于框架上，分別設置標準品孔、待測樣本孔和空白對照孔，記錄各孔位置。
4、加標準品：標準品孔中加入標準品50μL；空白對照孔不加。
5、加待測樣本：待測樣本孔中先加入生物素10μL，再加待測樣本50μL；空白對照孔不加。
6、加酶標工作液：每孔加入酶標工作液100μL；空白對照孔不加。
7、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
8、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板4次（也可用洗板機按說明書操作洗板）。
9、顯色：每孔先加入顯色劑A 液50μL，再加入顯色劑B液 50μL，37℃避光顯色15min。
10、終止：取出酶標板，每孔加終止液50μL，終止反應（顏色由藍色立轉黃色）。
11、測定：以空白孔調零，在終止后15分鐘內，用450nm波長測量各孔的吸光值（OD值）。
12、計算：根據標準品的濃度及對應的OD值，計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據樣本的OD值，在回歸方程上計算出對應的樣品濃度，也可以使用各種應用軟件來計算。最終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數。
【樣本要求】
1、樣本不能含疊氮鈉（NaN3），因為疊氮鈉（NaN3）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑制劑。
2、標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能立即試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。