兔紅細胞玫瑰花環試驗

實驗概要

本實驗介紹了兔紅細胞玫瑰花環試驗操作流程。玫瑰花環試驗，又稱為花結試驗。是測定淋巴細胞數量和功能的一種方法。

人類T和B淋巴細胞表面具有不同的受體。由于人類T淋巴細胞表面具有與綿羊紅細胞結合的受體，能與綿羊紅細胞非特異性結合，形成E花環，因此，T細胞也成為紅細胞花瓣形成細胞。根據E—玫瑰花環形成率，可以間接判斷機體細胞免疫力。目前，已廣泛應用于臨床，作為測定人群免疫狀態的一個指標。

主要試劑

1. 肝素(100單位/毫升)

2. 0.5%兔紅細胞懸液(用Hanks液配制)

3. 吸收過的胎牛血清：

取經56℃30分鐘加熱滅活后的胎牛血清加半量壓積兔紅細胞混合后，37℃水浴20分鐘，2000轉/分離心10分鐘，取上清液即成。

4. Hanks液

5. 豚鼠抗凝血

6. 淋巴細胞分層液

主要設備

滅菌注射器，針頭，試管，吸管等。

實驗步驟

1. 淋巴細胞提取

   1) 取豚鼠抗凝血2毫升，加3毫升Hanks液使之稀釋。加于3毫升淋巴細胞分層液液面之上(沿管壁輕輕加入，勿使兩液相混)。

   2) 2000轉/分離心30分鐘，吸淋巴細胞層到另一試管中加5倍體積的Hanks液洗1-2次，(1500轉/分離心10分鐘)棄上清即成。

2. 加吸收過的胎牛血清0.1毫升，0.5%兔紅細胞懸液0.2毫升，于淋巴細胞中。混合后，37℃水浴5分鐘。

3. 500轉/分離心5分鐘，放4℃冰箱中2小時后，棄大部分上清。

4. 染色及觀察

輕輕懸浮沉積的細胞。向懸液中滴一滴美蘭液，混合，10分鐘后取一滴放載玻片上，加蓋玻片鏡檢。

高倍鏡或油鏡下計數200個淋巴細胞，凡結合3個或3個以上的兔紅細胞者為陽性，計算花環形成細胞的百分率。