全國生物醫藥色譜會分會報告集錦(二)

　　2012年4月22日，全國生物醫藥色譜及相關技術學術交流會各分會在美麗的重慶大學虎溪校區繼續進行。“理論與方法”分會場，側重對色譜新理論及新方法的探討。涉及當前生物醫藥領域的前沿、熱門話題，有較高的學術性和前沿性。以下是個報告的精彩內容。

中國科學院大連化學物理研究所 許國旺主任

　　首先來自中國科學院大連化學物理研究所代謝組學研究中心主任許國旺研究員將他在代謝組學中的研究所得分享給大家。報告的題目是“代謝組學中提高代謝物分析靈敏度的新方法研究”。

　　1.代謝物的分析特點

　　許研究員提到，代謝組學是生命科學各領域研究小分子的有利工具，在病變標志物發現、療效判斷和病理研究中發揮積極的作用。由于代謝物在數量、種類、濃度、極性等方面的廣泛分布，單一的分析技術不能分析整個代謝組，因此需要多平臺和多方法的集成。

　　2.色譜-質譜代謝組學方法的不足

　　基于色譜-質譜的代謝組學方法中，會遇到共存的高濃度代謝物影響低豐度的物質的分析的情況。同時，一些極性代謝物，在反相柱上保留不好，而且在質譜檢測中離子化效率極低，影響了此類代謝物的分析。而這些極性代謝物，通常含量很低又富有生物功能。

　　3.‘擬’靶向代謝組學新方法

　　基于此因，許研究員課題組發展了‘擬’靶向的代謝組學方法，找出各代謝物質譜檢測的離子對，將非靶向方法中的全掃描方式轉變成靶向分析中的多反應檢測，以整體提高代謝組的分析靈敏度。同時，選擇性消除高濃度代謝物，并將衍生化與UPLC-MS的檢測相結合，極大地提高了痕量極性化合物的分析靈敏度。

東曹(上海)生物科技有限公司 張琳

　　來自東曹(上海)生物科技有限公司張琳博士以“新型蛋白質分析用大孔徑反相色譜柱的性能評價及其在單克隆抗體樣品分析中的應用”為題，介紹了TSKgel Protein C4-300的特點和優勢。

　　張博士介紹說，新型蛋白質分析用大孔徑反相色譜柱—TSKgel Protein C4-300被成功開發并應用于單克隆抗體樣品的分析。針對蛋白質樣品特點，結合填料孔徑、配基鏈長、鍵合密度、酸性條件下耐久性實驗確定新型色譜柱填料特性參數。

　　分離性能考察

　　1.采用幾種標準蛋白質樣品，考察各種色譜參數：柱溫、流速、三氟乙酸濃度對蛋白質分離的影響，并與其他反相色譜柱進行對比分離實驗。結果表明：新型色譜柱分析蛋白質具有高分辨率、高回收率、酸性條件下高耐久性等特點。

　　2.采用TSKgel Protein C4-300色譜柱對IgG蛋白質酶解產物樣品在尺寸排阻模式下分離餾分進行分析。結果表明：尺寸排阻色譜柱的各餾分在TSKgel Protein C4-300色譜柱獲得了更精細的分離，說明反相色譜柱與尺寸排阻色譜柱聯合可獲得更多信息。

天津商業大學 姜子濤教授

　　來自天津商業大學姜子濤教授以題為“Sol-gel法合成鈦膠整體HPLC柱及其在羧酸分析中的應用”作報告

　　姜教授說，鈦膠(TiO2)具有極好的化學穩定性和表面性質，對羧酸、生物堿、磷酸蛋白(肽)等有較強的吸附選擇作用。姜教授以Ti(OiPr)4為鈦源、醋酸做螯合劑、鹽酸做催化劑通過Sol-gel法合成具有較高比表面積的鈦膠整體HPLC柱，所合成的鈦膠整體柱為銳鈦礦型，比表面積為88m2/g，平均孔徑為9 nm。并應用于羧酸類化合物的分析，分離結果較好。

中國科學院化學研究所 黃嫣嫣

　　來自中國科學院化學研究所黃嫣嫣做的報告是“DMSO加速的色氨酸快速檢測新原理研究”。

　　黃嫣嫣介紹說，基于DMSO對色氨酸在HCl/HCOOH中顯色反應具有“催化”或“抑制”雙重效應的新現象，利用反相高效液相色譜與液質聯用等分析方法開展了機理研究。

　　結果顯示，DMSO催化顯色反應的原因在于“偶極非質子溶劑效應”;而生成無色副反應則是高含量DMSO抑制顯色現象的根源所在。

　　基于上述反應機理進行反應條件優化，發展了一種快速、簡便、高選擇性的色氨酸及含色氨酸殘基多肽、蛋白質的可視化檢測方法，大大提高了靈敏度和檢測效率，為相關多肽、蛋白質的構效關系研究以及疾病機制闡明提供有效的借鑒。

武漢大學藥學院 張玉林

　　來自武漢大學藥學院張玉林的報告題目是“L-高脯氨酸修飾的硅膠整體柱及其在手性氨基酸的毛細管電色譜分離與質譜檢測聯用分析中應用”。

　　張玉林介紹說，他們研制成功的L-高脯氨酸修飾整體柱對銅離子具有特征絡合作用，經Loading銅離子后，可以在無銅離子的緩沖液中對丹酰化氨基酸進行LE-CEC分離與MS檢測。

　　對于手性氨基酸分離的電色譜性能，研究了分離條件等對手性拆分的影響。結果表明：在優化的色譜和質譜條件下對多種丹酰化氨基酸實現了較好的CEC分離及MS檢測，結果具有較好的重現性和穩定性，柱使用壽命較長。

北京理工大學生命學院 孟朝陽

　　來自北京理工大學生命學院孟朝陽帶來了“親和毛細管電泳法測定大腸桿菌原生質體與ssDNA庫作用的結合常數”的報告。

　　報告中提到，親和毛細管電泳測定大腸桿菌原生質體與單鏈DNA(single-stranded DNA，ssDNA)相互作用的結合常數方法，用于表征原生質體與核酸適配體的結合能力。

　　實驗中固定溶質ssDNA庫的濃度不變，將大腸桿菌原生質體作為配體添加到電泳緩沖液中，改變電泳緩沖液中配體的濃度，由溶質遷移率和配體濃度的關系求算原生質體與ssDNA庫相互作用的結合常數。

　　經過實驗表明，親和毛細管電泳法可以作為研究原生質體與核酸相互作用評價和表征簡便方法，可用于小分子與微生物的相互作用研究。