全組織細胞色素氧化酶活性染色試劑盒產品說明書（中文版）
主要用途
全組織細胞色素氧化酶活性染色試劑是一種旨在使用細胞色素C催化人工電子供體染料二氨基聯苯胺的非酶源性自然氧化，形成棕褐色不溶性產物，來分析全組織樣品中細胞色素氧化酶活性的權威而經典的技術方法。該技術經過精心改良傳統NADI方法、成功實驗證明的。主要適用于各種動物組織的細胞色素氧化酶活性的定性檢測。產品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定，顯色清晰。
技術背景
細胞色素氧化酶（Cytochrome oxidase）是氧化呼吸鏈的酶部分的總稱。其存在于真核生物的細胞線粒體上，主要通過氧化磷酸化為細胞提供能量。二氨基聯苯胺（3,3’-diaminobenzidine，DAB）是人工電子供體染料，通過與金屬蛋白，例如含鐵蛋白細胞色素C中的物理性結合，產生非酶源性自然氧化，同時提供電子（細胞色素C作為電子受體）于呼吸鏈的電子傳遞系統，由此呈現出顏色變化和沉積，形成棕褐色不溶性產物，且不受乙醇影響。在DAB自然氧化的同時，產生活性氧，例如過氧化氫，由過氧化氫酶防止其聚集。在大量氧化型DAB的存在下，通過細胞色素氧化酶的作用，亞鐵細胞色素C被氧化成正鐵細胞色素C。由此氧化型DAB棕褐色不溶性產物被用于檢測組織細胞中細胞色素氧化酶的活性。
產品內容
清理液（Reagent A） 200毫升
染色液A（Reagent B1） 40毫升
染色液B（Reagent B2） 4瓶
反應液（Reagent C） 3毫升
固著液（Reagent D） 30毫升
產品說明書 1份
保存方式
保存染色液（Reagent B）和反應液（Reagent C）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里，有效保證6月
用戶自備
1.5毫升離心管：用于工作液配制的容器
培養箱：用于反應孵育
中性樹脂：用于切片封片
光學顯微鏡：用于切片染色后觀察分析
實驗步驟
染色開始前，將－20℃冰箱里的試劑置于室溫下融化；移取9毫升染色液A（Reagent B1）到1瓶染色液B（Reagent B2）里，混勻，標記為染色工作液，置于冰槽里備用，避免光照（注意：有效期1周）；繼續移取2.7毫升染色工作液到新的1.5毫升離心管，加入300微升反應液（Reagent C），混勻后，標記為反應工作液，置于冰槽里，避免光照。然后進行下列操作。
準備1個6孔細胞培養板
放進新鮮切除的動物組織樣本（注意：建議組織大小為0.5厘米厚，1厘米長；如果過大，最好刀切處理一下）
將組織壓平
小心加入3毫升清理液（Reagent A），清洗組織樣本
小心抽去清理液
小心加入3毫升反應工作液，浸沒整個組織
放進37℃培養箱，孵育60分鐘，避免光照
小心抽去反應工作液
小心加上3毫升清理液（Reagent A），清洗組織樣本
小心抽去清理液
重復實驗步驟9至10二次
小心加入3毫升固定液（Reagent D），浸沒整個組織
在室溫下孵育15分鐘
小心抽去固定液
小心加入3毫升清理液（Reagent A），清洗組織樣本
在室溫下孵育15分鐘
小心抽去清理液
重復實驗步驟15至17二次
后續石蠟切片（6微米厚）或冰凍切片（10微米厚）
在光學顯微鏡下觀察和計數：表達細胞色素氧化酶活性的組織細胞為陽性組織細胞，呈現棕色。
注意事項
本產品為10次操作
操作時，須戴手套
染色液（Reagent B）和反應液（Reagent C）避免反復凍融
染色工作液不宜久存，1周內使用為佳
陰性對照時，GENMEN反應工作液可含有疊氮化鈉
每次更換試劑溶液時，保持切片面基本晾干
試劑溶液在切片表面時，避免有氣泡存在，同時確保鋪滿切片表面
整個操作，在避光狀態下進行
染色孵育時間，根據樣品和酶活性強弱調整，通常為1至3小時
染色完成后，即刻進行光學顯微鏡觀察
樣品染色后保存，避免光照
細胞色素氧化酶活性染色參考圖像：
本公司提供系列組織細胞酶活性染色試劑產品
質量標準
本產品經鑒定性能穩定
本產品經鑒定顯色清晰
來源：上海一基實業有限公司
聯系電話：021-61119791
E-mail：2851717098@qq.com