樣品中如此微小的小分子化合物,究竟是如何進行分析的?
代謝物全譜分析,通過色譜串聯質譜(HPLC-MS/MS)技術鑒定樣品中小分子化合物,從而達到對其進行定性定量分析的目的。利用超高效液相色譜質譜聯用技術對物質分離和鑒定,結合質譜數據庫信息注釋和分類,精準定性,幫助我們從整體上了解樣本的性質,詳細的描述樣本中的物質組成和含量等信息。
01 檢測平臺
02 技術流程
①樣品采集→②代謝物提取→③樣本預處理→④樣本檢測→⑤軟件定性定量
03 代謝物定性定量方法
(1)定性分析軟件
使用Compound Discoverer 3.3 進行保留時間矯正、峰識別、峰提取等工作,根據二級質譜信息利用Compound Discoverer分析質譜原始數據,匹配Thermo mzCloud,、Thermo mzValut、ChemSpider等數據庫,獲得代謝物定性及定量數據。
(2)代謝物定量計算方法
A.相對濃度:根據各樣品中代謝物峰面積,計算代謝物在樣品中相對濃度。計算公式:各物質相對濃度=內標濃度/內標峰面積*代謝物峰面積/樣品取樣量,單位:μg/mL。
B.相對百分比:根據各樣品中代謝物峰面積,計算代謝物在樣品中相對百分比。計算公式:各物質相對百分比=鑒定代謝物峰面積/代謝物總的峰面積*100%,單位:%。
04 技術特點
1. 較高的靈敏度、分辨率;
2. 較寬的動態范圍;
3. 適合于生物樣本中復雜代謝產物的檢測和潛在標志物的鑒定。
05 應用方向
1. 表型和生理功能研究;
2. 中醫理論研究;
3. 疾病病理研究;
4. 食品科學與營養學研究;
5. 臨床診斷及治療;
6. 畜牧與農林業研究;
7. 藥物研究;
8. 環境毒理研究。
06 送樣要求
1. 血清、血漿:100ul/sample;-80℃保存,干冰寄送;若發生溶血,建議重新采樣。
2. 尿液:1 mL /sample;-80℃保存,干冰寄送。
3. 組織:200mg/sample;-80℃保存,干冰寄送。
4. 細胞:≥1×10/sample;-80℃保存,干冰寄送。
5. 腦脊液:400 ul /sample;-80℃保存,干冰寄送。
6. 糞便及腸道內容物:200mg/sample;-80℃保存,干冰寄送。
7. 植物樣本:鮮樣≥3g/sample,干樣≥1g/sample。
8. 微生物樣本:≥1×10/sample;-80℃保存。
9. 注:避免反復凍融