共聚焦顯微鏡有較高的分辨率,而且能觀察到樣本隨時間的變化。因此,共聚焦顯微技術在生物學研究領域起著不可或缺的作用。以下為共焦顯微技術的幾個主要應用方面:
(1)組織和細胞中熒光標記的分子和結構的檢測:
利用激光點掃描成像,形成所謂的“光學切片”,進而可以利用沿縱軸上移動標本進行多個光學切片的疊加形成組織或細胞中熒光標記結構的總體圖像,因此可以用于觀察切片和一些表面不平的標本,特別是研究具有長突起的神經元時更有使用價值。同時可以做三維圖像重建和標記強度的半定量分析。
(2)定量或半定量測量Ca2+和pH等細胞內離子濃度及變化:
激光掃描共聚焦顯微鏡可以提供更好的亞細胞結構中鈣離子濃度動態變化的圖像,這對于研究鈣等離子細胞內動力學有意義。最好與電生理等技術相結合來觀察離子變化與電生理學指標的相關性。
(3)熒光光漂白及恢復技術:
利用高能量激光束將細胞內某一部分中選定靶區域的某種熒光淬滅,然后觀察鄰近相同的熒光標記物重新擴散入該區域的速度和方式,從而分析細胞內蛋白質運輸、受體在細胞膜上的流動和大分子組裝等細胞生物學過程。
(4)長時程觀察細胞遷移和生長:
目前激光掃描共聚焦顯微鏡的軟件一般均可自動控制地進行定時和定方式的激光掃描,而且由于新一代激光掃描共聚焦顯微鏡的探測效率的提高,只需要很小的激光能量就可以達到較好的圖像質量,從而減小了每次掃描時激光束對細胞的損傷,因此,可以用于數小時的長時程定時掃描,記錄細胞遷移和生長等細胞生物學現象。
(5)其他的生物學應用:
用高能量激光束進行細胞損傷和損毀實驗,一般要用紫外激光束進行細胞損毀;細胞間通訊研究;光解籠鎖活化技術等
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