酸度
取本品3%的混懸液，依法測定（通則0631），pH值應為4.0~6.0。
有關物質
照高效液相色譜法（通則0512）測定，臨用新制。
溶劑：N,N-二甲基甲酰胺-水（1:1）。
供試品溶液：取本品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加N,N-二甲基甲酰胺溶解并定量稀釋制成每1mL中約含0.8mg的溶液，精密量取適量，用溶劑定量稀釋制成每1mL中約含80μg的溶液。
對照品溶液：取兩性霉素B對照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加N,N-二甲基甲酰胺溶解并定量稀釋制成每 1mL中約含0.8mg的溶液，精密量取適量，用溶劑定量稀釋制成每1mL中約含0.8μg的溶液。
系統適用性溶液：取兩性霉素B約8mg，置50mL棕色量瓶中，加N,N-二甲基甲酰胺5mL使溶解，用甲醇稀釋至刻度，加鹽酸0.1mL，搖勻，放置1小時，取5mL，置10mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻。
靈敏度溶液：精密量取對照品溶液適量，用溶劑定量稀釋制成每1mL中約含0.08μg的溶液。
色譜條件：用十八晚基硅烷鍵合硅膠為填充劑（4.6mm×250mm，5μm或效能相當的色譜柱），以乙腈磷酸溶液（pH1.00±0.05）（300:700）為流動相A，以乙腈磷酸溶液（pH1.00±0.05）（500:500）為流動相B，按下表進行線性梯度洗脫，流速為每分鐘0.8mL，柱溫為25°C，檢測波長為303nm和383nm，進樣體積100μL。