1.尿乳糖測定
非特異性，當乳糖水平超過1%，提示腸道廣泛受累。
2.負荷試驗
用葡萄糖-半乳糖和蔗糖負荷試驗后，其血糖水平上升正常。此外乳糖負荷試驗后一段時間（2～12小時），產生水樣腹瀉，糞便顯酸性，pH低下，乳酸增加。故乳糖負荷試驗異常、葡萄糖-半乳糖負荷試驗正常是該病的診斷依據。
3.酶活性測定
空腸活體組織進行酶學檢查可證實乳糖酶缺乏。
