關于噬菌體的培養和應用

可以用M13噬菌體展示系統來構建cDNA文庫嗎？

A: 通常M13不適合cDNA表達，因為M13噬菌體展示需要前導序列（分泌所需）和外殼蛋白pIII或pVIII的N末端之間的框內表達。為了將相應的蛋白質適當地融合到外殼蛋白中，插入物必須在兩端的正確閱讀框中并且不包含框內終止密碼子。這導致M13 cDNA文庫中產生的克隆數量極少。

Q: 培養噬菌體可以用什么培養基？

A: TSB / TSA可用于培養大部分噬菌體。然而，不同的噬菌體展示系統，適合的培養基可以是各種各樣的。

Q: 噬菌體M13可以感染哪種大腸桿菌？ 它是否有機會污染我們實驗室中的所有細胞株？

A: M13噬菌體是一種絲狀噬菌體，它使用細菌F接合菌毛的尖端作為受體來促進感染過程。因此，它們僅對含有F質粒（F+）的大腸桿菌菌株具有特異性。對于實驗室中的菌株，我們建議您檢查它們是否含有F質粒。如果他們不具有，M13噬菌體就不能感染它們。

Q: 大腸桿菌TG1宿主菌是否含有抗生素抗性？

A: 大腸桿菌TG1菌株不含抗生素耐藥性，而噬菌體感染的TG1菌株可通過2YT-AK培養基（2YT含100μg/mL氨芐青霉素、50μg/mL卡那霉素）篩選。

Q: PFU和CFU的區別？

A: pfu，指菌斑形成單位，是衡量單個感染性粒子數量的單位，通常用于計算噬菌體。cfu，指的是集落形成單位，是活細胞的量度，其中集落代表源自單個祖細胞的細胞集合，并且通常用于計數細菌（例如大腸桿菌）。

Q: 怎么判斷構建的噬菌體文庫的優劣？

A：從免疫文庫中選擇的抗體親和力與文庫的大小成正比，文庫庫容越大，抗體親和力越好。通常，最終庫容的大小應該達到10⁸。它足夠大以分離高親和力抗體。此外，作為一個優質文庫，它應該具有高度的多樣性。最終文庫的QC結果表明，所有隨機挑選的克隆均未發現共同的序列，表明文庫的多樣性處于很高的水平。