多交點多光子顯微技術(multifocal multiphoton microscopy,MMM)提高了激發光能的利用率和成像速度,可以實現樣品的三維快速多光子激發熒光顯微成像,并且具有對活體樣品損傷小,成像深度大,圖像信噪比高等優點。
熒光顯微技術已經成為生物醫學領域的重要研究工具,激光掃描共焦顯微(laser scanning confocal microscopy,LSCM) [2]和多光子激發熒光顯微(multiphoton microscopy ,MPM) [3]技術可用于實現生物樣品的高空間分辨三維成像, 但共有的缺點是要對樣品進行逐點掃描 , 因此成像速度低。
提高多光子激發熒光顯微成像速度的方法之一是提高激發光斑在樣品上的掃描速度 。由于圖像上每一像素點的測量時間減少了, 為了得到足夠的信噪比,需要增加熒光團濃度或激發光束強度等,但這此受到所研究的生物樣品的限制, 過高的熒光團濃度會干擾生物樣品的正常功能, 同時會對樣品 產生毒性。另外, 由于目前大多數多光子激發顯微成像系統采用如檢流計振鏡和共振鏡等機械掃描方式,過分提高掃描速度會嚴重影響到掃描的精度。
另一種提高多光子激發熒光顯微成像速度的方法是利用多個激發光點同時激發樣品, 這樣 , 即使采用傳統的機械掃描方式如檢流計振鏡和Nipkow盤,成像速度也會得到顯著提高 , 不但可以實現生物樣品的實時多光子激發顯微成像, 還可以用眼睛通過目鏡直接觀察 , 這就是多焦點多光子顯微技術(multifocal multiphoton microscopy,MMM )。
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