建立雜交瘤技術的目的是制備對抗原特異的單克隆抗體，所以融合細胞一方必須選擇經過抗原免疫的B細胞，通常來源于免疫動物的脾細胞。脾是B細胞聚集的重要場所，無論以何種免疫方式刺激，脾內皆會出現明顯的抗體應答反應。融合細胞的另一方則是為了保持細胞融合后細胞的不斷增殖，只有腫瘤細胞才具備這種特性。·選擇同一體系的細胞可增加融合的成功率。多發性骨髓瘤是B細胞系惡性腫瘤，所以是理想的脾細胞融合伴侶。
使用細胞融合劑造成細胞膜一定程度的損傷，使細胞易于相互粘連而融合在一起。最佳的融合效果應是最低程度的細胞損傷而又產生最高頻率的融合。聚乙二醇(PEG1 000～2 000)是最常用的細胞融合劑，一般應用濃度為40%(W/V)。