關于柱壓的幾個問題

一、問：這段時間一直在做生物堿，流動相選擇的是乙睛：0.02mol/l磷酸二氫鉀（26：74），現在實驗做完了，最后沖柱子。先長時間乙睛：水沖柱，再用甲醇：水沖柱，最后用甲醇沖柱。柱壓一直很高，請問各位，是否不該這樣沖柱？該怎樣解決？

Jimmy_ok：乙睛和甲醇沒有多大區別的，只是乙睛黏度小，對于柱子保護有利，當然價格也高些，個人感覺完全可以用甲醇替代沖柱（當然實驗室有錢就另說了）。從你的流動相上看，水性比例較大，且使用緩沖鹽。所以沖柱子建議先5%甲醇1小時，然后50%甲醇，80%，100%甲醇各0.5小時，第二次開機時先用5%甲醇沖20分鐘后再換流動相。柱壓過高時可以采用低流速，長時間來沖。順便提一句，流動相和樣品都要嚴格過濾的！

adashuishui：

我的建議：

1、如果你做最后一個樣品的時候柱壓還是正常的，那么可能就是沖柱出現了毛病。由于你的流動相采用了較大比例的緩沖鹽，因而沖柱的時候要采用含水相較多的溶液低速沖洗，如果有機相的比例過高，磷酸二氫鉀有可能結晶析出導致柱壓升高。

2、如果你做最后一個樣品的時候柱壓已經很高，那就是樣品造成的。此時色譜柱的柱頭已經遭到污染，因而需要清理。方法有：A、用流動相低速反沖；B、打開柱頭，將污染物刮去（只有很薄的一層，大約3mm)，然后用相同類型的已經廢棄的色譜柱的出口端的填料將柱頭填平（以少量甲醇調成膏狀）。

3、小心不要隨便用別人用過的沖柱液，因為長時間放置的液體有可能進入粉塵，也有可能長菌。因而一定要保證其是干凈的，沒有顆粒存在（要過濾后使用）。

pantherww：

1、我想你應該注意一下你的甲醇是不是HPLC級的，不是的話就應該先過濾在使用。

　　2、你可以不用乙睛，畢竟成本太貴，而且效果和甲醇差不多，先用100%的甲醇沖洗20分鐘，再用甲醇：水（50：50），沖洗30分鐘即可。

　　3、如果柱壓還是太高，可以用甲醇：水（50：50）反沖柱子1小時，再正沖30分鐘。

　　4、注意是否是預柱堵了。

　　5、HPLC儀器有它自己的一個濾器，可以考慮更換里面的濾芯。

zslnutcm：由于流動相中有磷酸鹽，所以實驗結束時先用乙睛沖柱，有機溶劑會造成無機的磷酸鹽析出，堵住了管路。建議先用溫的純水沖洗管路，看看能不能使壓力降下來，再把泵的濾頭拆下來，用甲醇超聲清洗一下，或者干脆換個濾膜，應該會對你遇到的問題有幫助。

toyosa：一般柱壓過高是最常碰到的問題。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的問題，您可按下面步驟檢查問題的起因。

1、如果你有保護柱的話，拆去保護柱，看柱壓是否還高，否則是保護柱的問題，若柱壓仍高，再檢查；

　　2、把色譜柱從儀器上取下，看壓力是否下降，否則是管路堵塞，需清洗，若壓力下降，再檢查。

　　3、將柱子的進出口反過來接在儀器上，用10倍柱體積的流動相沖洗柱子，(此時不要連接檢測器，以防固體顆粒進入流動性)。這時，如果柱壓仍不下降，再檢查；

　　4、更換柱子入口篩板，若柱壓下降，說明你的溶劑或樣品含有顆粒雜質，正是這些雜質將篩板堵塞引起壓力上升。若柱壓還高，請與柱子的廠商聯系。一般情況下，在進樣器與保護柱之間接一個在線過濾器便可避免柱壓過高的問題。

ameng：我的個人意見：

1、乙腈-水（10：90），0.5的流速，300psi的壓力我覺得很正常啊，本人平時水100%沖洗時壓力一般為800多psi（流速1），50%乙腈/水壓力差別不大，在0.5的流速下面壓力通常要比1ml時壓力的一半還要小。因此個人認為300的壓力正常。
　　2、如果懷疑有異，首先檢查流速正常否，在出口接上一個10ml量筒，運行20min看流出體積。
　　3、如果流速正常應該沒問題。
　　4、如果流速不正常則要懷疑是否泵的問題，如果是雙泵運行，建議你換用單泵100%運行，分開測流速，找出不正常的泵。
　　5、流速不夠多半就是單向閥失靈，拆下來超聲清洗即可，實在不行換新的，waters的單向閥2500元/對。
　　6、重新看上面所述出峰變晚那估計應該是流速不夠了。
　　7、另外還有一個問題，如果你是直接乙腈和水分開雙泵混合運行，那么就要考慮是因為乙腈和水混合產生氣泡導致壓力下降，建議先行混合脫氣后單泵運行。

三、問：有一個樣品只能用四氫呋喃溶解（用純甲醇則成混濁液），而我的流動相是甲醇比乙腈＝90：10，柱子是hp的c8柱，柱長15cm，進樣后發現柱壓上升很高，然后用純甲醇沖柱子，在流速為0.5/min的情況下，達到了110，而平時只有60，現在該怎么辦？我的柱子是不是不行了？我嘗試過反沖也沒什么效果啊，很急，希望各位專家給個答復，謝謝！！！

星語心愿：1.請不要再用甲醇沖洗柱子了，那樣你的柱子會堵塞，破壞會更大。你的樣品在純甲醇成混濁液，那用90%甲醇做流動相，肯定堵呀！
　　2.你可不要反沖呀！你的柱子會降低使用壽命的。
　　3.請問你的樣品在水、乙腈中的溶解度怎么樣，如果溶解度好的話請用乙腈沖洗，或用水和乙腈混和液沖洗。
　　4.只能選擇本產品易容的溶液沖洗，實在不行，用四氫呋喃沖洗吧，流速小一點（0.5ml/min）。沖完后用30%甲醇溶液沖洗，再用甲醇沖洗，以活化柱子。

一草亭：柱壓高我一般這樣做：

1.按管路的反方向從后往前，采用一一坼卸的辦法依次檢查各個接口，特別是混樣器處的前后接口，特別注意各道接口處的濾膜，拿下來超聲（甲醇/水），一般經過全面的檢查柱壓就會降低很多。
　　2.泵前后的接口比較復雜，更要一一檢查，這地方經常容易出現不暢通的現象，解決辦法還是超聲。
　　3.如果用過緩沖鹽，很可能要考慮緩沖鹽的析出，如果析出在泵前后的接口處，那就太好辦了——超聲，如果析出在柱子里，那就麻煩了，反復用甲醇和水慢速沖吧，不行也可以考慮異丙醇。

四、有關柱壓和保留的疑問

cidyling：關于柱壓升高的解決方法，我有以下幾點心得：

1、如果用了鹽類流動相，在使用完畢后清洗柱子時要先用水置換出泵和柱子中的含鹽流動相，然后用不同配比的甲醇或乙腈洗滌柱子，比如：5%、10%、20%、30%、90%。
　　2、如果所檢測的藥物是不溶于水、乙腈、甲醇的，就要考慮是否會在洗柱子時不會沖出去，那樣就很容易堵塞柱子，那樣就需要加入一些可溶藥物的酸類或其他類在沖洗液中。
　　3、鹽類對泵的損傷也是很嚴重的，所以一定要先用水沖洗干凈泵。
　　4、柱子用了一段時間以后需要把篩板拆下超干凈，柱壓也可降下不少。
　　5、柱子也是有疲勞限度的，如果你一直用他而不讓他休息，他肯定會和你鬧意見的，所以還是那句老話，沖柱子要耐心，要愛護他才能使他更長壽更好用更聽話。

xiangfree：我再給你的建議：

1、每次做完試驗要沖柱，我個人經驗先20%醇，再80%水（我試過先5%，再50%，再純甲醇沖，等各種比例沖洗，但最后發現我說的那個比例沖洗效果是最好的）這是一般做法。
　　2、如果有特殊原因（如用了離子對試劑等）可長時間小流速沖洗，如果是老柱子，那有可能就是堵了，你可以試著小流速反向沖洗，注意流速一定要小不然柱子可能會壞的。
　　3、另外，向你說的可能是篩板堵了，那你就要拆下來，用某些溶劑（稀硝酸、稀硫酸、洗液等）超干凈，再使用。
　　4、還不行，那只有拆柱子，挖掉柱頭的填料（2mm左右），在重新裝一些（裝時要多出來些，最好有小鼓包，這樣才能裝緊）再使用，一般都行，我個人搞過幾個老柱子，柱效蠻高的。

不過這只是我個人經驗，可能不適合你呀！

五、問：我用C18反相柱、甲醇：磷酸二氫鈉（0.01mol/L，pH7.0）（60：40）、1ml/min分離一個生物堿（長春新堿，弱堿）的硫酸鹽，在走完流動相后沒有用水過渡，直接用甲醇沖洗，懷疑是磷酸鹽析出，柱壓漸升高至40多MPa，后又用水沖洗，柱壓降至29MPa左右，后又用甲醇、乙腈沖洗，在0.5ml/min條件下柱壓即達20MPa左右，請問，柱子是磷酸鹽析出還是有否可能生物堿析出？接下來如何處理？沖洗到柱壓多少就基本完成？

apple342：既然水沖有效，就繼續用水沖吧，柱壓應與你上流動相前用同流速同溫度水沖時的壓力差不多，如果你做了記錄的話，不然，你就只好多沖幾個鐘頭，建議用90%的水，10%的甲醇。如果著急還可以把水稍加熱，使鹽溶得更快更干凈。用水沖時，如果壓力下來了，最好把流速打到1.2ml/min沖一下，把泵頭上的鹽洗掉。

xwcheng：你的柱子應該是磷酸鹽的析出導致柱壓過高！

再生方法：
　　1. 用95%水（切記C18柱不可用100%水沖洗，因為C18烷基在有機相中自然張開如手掌狀，如果用100%水沖會導致不可恢復性的收縮）反沖！！！注意流速要減小！（比正沖小上一般）！
　　2. 將柱子放在水浴鍋（沒有柱溫相的情況下），溫度根據柱子的承受溫度控制（說明書有柱子的溫度范圍），用THF沖！
　　3. 最后用95%乙腈5%水沖，完了保存在100%乙腈中，此時壓力會正常（視你的柱子的直徑、長度、粒徑有所不同）！