細胞和動物組織核蛋白的提取方法
產品組成 310001 310002
規格 50 assays 100 assays
Buffer A (Cytoplasmic Extraction Reagent) 10ml 20ml
Buffer B (Nuclear Extraction Reagent) 10ml 20ml
蛋白酶抑制劑混合物 250ul 500ul
使用方法：
A． 細胞蛋白提取
1. 取5-10×106個細胞，在4℃，500×g條件下離心2-3分鐘，小心吸取培養基，盡可能吸干，收集細胞。
2. 用冷PBS洗滌細胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。
3. 每20ul細胞壓積中加入200μl冷的Buffer A，2ul蛋白酶抑制劑混合物，高速渦旋振蕩15秒，置冰上10分鐘。
4. 再次高速渦旋振蕩5秒，然后在4℃，16000×g條件下離心5分鐘。
5. 快速將上清吸入另一預冷的干凈離心管，即可得到胞漿蛋白，請置于冰上或-80℃冰箱保存備用。
6. 在沉淀中加入200μl冷的Buffer B，2ul蛋白酶抑制劑混合物，高速渦旋振蕩15秒。
7. 置冰上40分鐘，每隔10分鐘高速渦旋振蕩15秒。
8. 在4℃，16000×g條件下離心10分鐘。
9. 快速將上清吸入另一預冷的干凈離心管，即可得到核蛋白。
B． 組織蛋白提取
1. 取適量組織樣本剪碎，加冷PBS，用組織勻漿器勻漿至無明顯肉眼可見固體（或用液氮研磨），冰上靜置5分鐘，小心將上清吸入另一預冷的干凈離心管。
2. 在4℃，500×g條件下離心2-3分鐘，棄上清。
3. 按照細胞蛋白的提取方法的第3步驟往下操作即可。
上述蛋白提取物請分裝后于-80℃冰箱保存備用。