固定相為液體,根據被分離的組分在流動相和固定相中的溶解度不同而分離。依固定相和流動相的極性不同可分為正相色譜法和反相色譜法。正相色譜法采用極性固定相,流動相為相對非極性的疏水性溶劑,常用于分離中等極性和極性較強的化合物;反相色譜法一般用非極性固定相,流動相為水或緩沖溶液,適用于分離非極性和極性較弱的化合物。其中,反相色譜應用最廣。