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  • 發布時間:2022-11-10 11:41 原文鏈接: 關于琥珀密碼子的基本介紹

      琥珀密碼子(amber codon)指mRNA的多核苷酸鏈中的終止密碼子(UAG),它引起蛋白質翻譯的中止。這個名字的由來是因為這個密碼子是在大腸桿菌噬菌體T4的“琥珀型”突變種中發現的,T4突變種的發現者是德國人H.Bernstein,而Bernstein這個姓在德語中意為“琥珀”。當mRNA的一個編碼某個氨基酸的密碼子由于堿基的置換改變為終止密碼子UAG時,則肽鏈合成提前終止,即為琥珀密碼子突變,稱之為琥珀突變。琥珀突變是三種終止密碼突變之一。終止密碼突變也可叫無義突變(nonsense mutation)。該突變一般是致死的。琥珀突變以符號am表示,如S基因的琥珀突變可寫成Sam。

      目的:構建帶有琥珀突變的輔助病毒VCSM13N1,為建立選擇感染性噬菌體(SIP)技術平臺奠定基礎。方法:選擇輔助病毒VCSM13蛋白ⅢN1區的Q51作為靶位點,采用重疊延伸PCR方法對其進行定點突變,經酶切及序列分析進行確認;噬斑計數法檢測該琥珀突變在允許和非允許菌株中的開、關效應;以HBsAg抗體作為模式體系來確定該突變子作為輔助病毒的可行性,并對其性能進行綜合評價。結果:獲得了琥珀突變子VCSM13N1,在允許菌株XL1-Blue中其滴度達到2.5×1011,與野生型VCSM13相似(4×1011),而用非許可菌株HB2151進行噬斑計數時,滴度在106水平,降低了數萬倍。來源于菌株HB2151的突變病毒感染XL1-Blue計數噬斑,其滴度最高為5×109,降低了50倍;以其在許可菌中制備HBsAg噬菌體抗體,可以得到與野生型相似的結果。結論:琥珀突變子VCSM13N1可以作為輔助病毒,而且在非允許菌株HB2151中有一定的關閉效應。

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