首先，甲醇酵母中沒有穩定的質粒，所以其表達載體采用整合型質粒。利用醇氧化酶（甲醇代謝的關鍵酶）基因-1（AOX1）的啟動子（PAOX1）和轉錄終止子（3′AOX1）構建成整合型表達載體。PAOX1是一個極強的啟動子，醇氧化酶的產量最高可占甲醇酵母中可溶性蛋白質的30%[2]，所以能使外源蛋白質在它的控制下高效產生。其次，在載體中加入釀酒酵母的分泌信號和前導肽序列（α因子）構建分泌型載體，一方面可以減輕宿主細胞的代謝負荷，另一方面可以減少宿主細胞蛋白水解酶對外源蛋白質的降解，pPIC9K、pMETαA、B、C均為此類載體。此外，使多拷貝目的基因整合入甲醇酵母染色體，形成多個表達單元，產生高產的菌株，此類載體有pAO815、pPIC3.5、pPIC9等。
摘要以紫外線和水楊酸誘導后的煙草為材料,對經過修飾的煙草I類幾丁質酶和I類β21,32葡聚糖酶cDNA進行了克隆和序列分析,然后分別加上Hsr203J啟動子和NOS終止子,依次插入到同一個雙T植物表達......
摘要:從大腸桿菌E.colik-12中通過PCR克隆出磷酸果糖激酶編碼基因(pfkA),將其連到表達載體pCMVTNTTMvector。連接構建成重組質粒Ku-1,導入谷氨酸棒桿菌B4(已經誘變改造)......
摘要:從大腸桿菌E.coliK-12中通過PCR擴增出磷酸果糖激酶編碼基因(pfkA),將其與表達載體pCMVTNTTMvector連接構建成重組質粒pKu-2,轉化谷氨酸棒桿菌B10,并得到表達。酶......
【摘要】目的于真核細胞系CHO細胞中表達人源性抗-D基因工程抗體,為人源性抗-D基因工程抗體在臨床上的應用打下堅實的基礎。方法脂質體法將真核表達載體pAH4604/VH和pAG4622/VL共轉染體外......
摘要:利用PCR擴增技術以嗜熱脂肪芽孢桿菌IAM11001染色體DNA為模板,擴增得到嗜熱脂肪芽孢桿菌過氧化氫酶編碼基因perA。再與經EcoRⅠ酶切的溫控表達載體pBV220連接,構建重組質粒,并轉......
摘要:從大腸桿菌E1coliK12中通過PCR擴增出磷酸果糖激酶編碼基因(pfkA),將其與表達載體pCMVTNTTMvector連接構建成重組質粒pKu1,轉化谷氨酸棒桿菌B4,并得到表達.酶性測定......
【摘要】目的:建立穩定的基因工程細胞系。方法:將含有人腫瘤壞死因子α(hTNFα)全長cDNA插入表達載體pSNAV2.0,產生重組質粒pSNAV2.0-TNFα,利用陽離子脂質體介導將其轉染到人HE......