分裂指數測定可用蓋片培養法,亦可直接在小平皿中進行。在計算分裂相時要掌握好分裂相標準,選擇密度近似區觀察計數。
一、原理
體外培養細胞生長、分裂繁殖的本領,可用分裂指數來顯示.它與生長曲線有一定的聯系,如跟著分裂指數的不斷提高,細胞也就進入了指數生長期.
分裂指數指細胞群體中分裂細胞所占的百分比,它是測定細胞周期的一個主要指標,也是不同實驗研究選擇細胞的主要依據.
二、儀器、用品與試劑
1、儀器與用品：CO2培養箱、普通顯微鏡、細胞培養皿、蓋玻片、吸管
2、試劑：培養液、胰酶、甲醇、冰醋酸、Giemsa染液
三、操作步驟
1、消化細胞,將細胞懸液接至內含蓋玻片的培養皿中.
2、CO2培養箱中培養48小時,使細胞長在蓋片上.
3、取出蓋片,按下列順序操作：
PBS漂洗3分鐘→甲醇：冰醋酸=3：1固定液中固定30分鐘→Giemsa液染色10分鐘→自來水沖洗.
4、蓋片晾干后反扣在載玻片上,鏡檢.
5、計算:
分裂指數=分裂細胞數/總細胞數×100%
四、注意事項
操作時動作要輕,以免使蓋片上的細胞脫落.
附：Giemsa染液配制：
稱Giemsa粉末0.5克,加幾滴甘油研磨,再加入甘油（使加入的甘油總量為33ml）.56℃中保溫90—120分鐘.加入33ml甲醇,置棕色瓶中保存,此為Giemsa原液.
使用時按要求用PBS稀釋.一般稀釋10倍.