該法較簡單，成本低，易操作，比較適用于商品藥物的檢測。
1、在“超凈臺”中，用經（酒精燈）火焰滅菌的接種環挑取適量細菌培養物，以劃線方式將細菌涂布到平皿培養基上。具體方式；用滅菌接種環取適量細菌分別在平皿邊緣相對四點涂菌，以每點開始劃線涂菌至平皿的1/2。然后，找到第二點劃線至平皿的1/2，依次劃線，直至細菌均勻密布于平皿。（另：可挑取待試細菌于少量生理鹽水中制成細菌混懸液，用滅菌棉拭子將待檢細菌混懸液涂布于平皿培養基表面。要求涂布均勻致密。）
2、以無菌操作將滅菌的不銹鋼小管（外徑為4毫米、孔徑與孔距均為3毫米，管的兩端要光滑，也可用玻璃管、瓷管），放置在培養基上打孔，將孔中的培養基用針頭挑出，并以火焰封底，使培養基能充分的與平皿融合（以防藥液滲漏，影響結果）。
3、加樣：按不同藥液加樣，樣品加至滿而不溢為止。
4、將平皿培養基置于37℃溫箱中培養24小時后，觀察效果。