1.患者一般取仰臥位，或根據病灶穿刺部位選取側臥位或俯臥位。
2.先用普通探頭掃查，初步確定穿刺點，用色筆做好皮膚標記。
3.對穿刺區域進行皮膚常規消毒。鋪消毒巾，換用已消毒的穿刺探頭。再次確定穿刺點和穿刺角度，將穿刺引導線對準穿刺取樣目標，估測穿刺深度。
4.用1%利多卡因溶液5ml對皮膚、皮下、胸腹壁肌肉、胸膜或腹膜逐層浸潤麻醉。
5.在局麻部位將帶針芯的引導針刺入胸腹壁軟組織（勿刺破胸膜或腹膜），然后重復用消毒探頭及導向器瞄準穿刺目標，注意初步固定探頭和導針穿刺方向。
6.取出導針針芯，通過導針插入穿刺針，穿刺針尖勿穿透胸腹膜。
7.當屏幕上目標顯示最清晰時，囑患者屏住呼吸，將超聲引導線對準目標并充分固定探頭與穿刺的角度。將穿刺針迅速推進，直至針尖強回聲進入病灶或腫塊邊緣預定的穿刺位置。
8.手動負壓抽吸，以肝穿刺為例。提拉配套活檢針的針栓后，在患者屏氣條件下，迅速將針推入腫塊內2～3cm，停頓1～2s，然后旋轉360°退針，將標本置入10%福爾馬林溶液中固定，準備送病理檢查。如此重復取材2～3次。
9.自動活檢，以肝穿為例。將配以專用活檢針的自動活檢裝置，在患者屏氣條件下，迅速進針直至腫塊邊緣，立即掀按扳機，“槍響退針”。患者可以恢復自由呼吸。將標本置于10%福爾馬林溶液中固定，準備送病理檢查。如此重復取材2～3次（注：前列腺活檢可能多達4～6次）。