M-MLV反轉錄酶比AMV反轉錄酶缺乏連續性,因此要獲得像AMV反轉錄酶反應中產生同樣量的cDNA就要求使用較多單位的M-MLV反轉錄酶。用1微克的mRNA起始合成第一條鏈的cDNA,要用8單位的M-MLV反轉錄酶才相當于1單位的AMV反轉錄酶的作用。該酶很容易被亞精胺(Spermidine)所抑制,該酶絕對不能用Promega的RiboprobeAMV反轉錄酶5X反應緩沖液,也不能用Promega的RiboclonecDNA第一條鏈緩沖液,因為這二種緩沖液均含有亞精胺。