鏈霉素的用法如下，用于肌肉注射，目前認為成人1天750毫克一次注射即可以達到治療目的，過去的500毫克每天2次肌肉注射，它的療效與一次肌肉注射是完全相同的。所以說，一次750毫克肌肉注射劑量少了250毫克一天，因劑量減少而副反應也減少了。對個別病情嚴重的患者劑量可以增加甚至加倍，但持續應用時間不能過長，一般不宜超過1周，而且必須在嚴密觀察下應用。老年人劑量適當減少，兒童每公斤體重每天25毫克左右，也必須嚴密觀察，一有副反應的苗頭應該及時采取措施。現在我們使用的是硫酸鏈霉素，過去曾有雙氫鏈霉素，因為較多病人出現永久性的失聰（耳聾），所以現在雙氫鏈霉素已被國家醫藥管理局淘汰，不再生產和使用。
鏈霉素在肌肉注射以后，血液吸收高峰濃度可以在半小時到二小時中出現，有效的抑制細菌生長的濃度可以維持12個小時，年齡較大的患者可能時間更長些。鏈霉素的排泄主要由腎臟進行。注射鏈霉素后它容易滲入胸腔、腹腔內，也可以通過胎盤進入胎兒的羊水中，并且藥濃度也較高，正因為在羊水中濃度較高，所以不能用于孕婦。又由于不能通過（或少量通過）血腦屏障，所以，不能用于治療結核性腦膜炎。