青霉素由肌內注射或靜脈滴注給藥。
1、成人：肌內注射，一日80萬～200萬單位，分3～4 次給藥；靜脈滴注：一日200萬～2000萬單位，分2～4次給藥。
2、小兒：肌內注射，按體重2.5萬單位/kg，每12小時給藥1次；靜脈滴注：每日按體重5萬～20萬/kg，分2～ 4次給藥。
3、新生兒（足月產）：每次按體重5萬單位/kg，肌內注射或靜脈滴注給藥；出生第一周每12小時1次，一周以上者每8小時1次，嚴重感染每6小時1次。
4、早產兒：每次按體重3萬單位/kg，出生第一周每12 小時1次，2～4周者每8小時1次；以后每6小時1次。
5、腎功能減退患者：輕、中度腎功能損害者使用常規劑量不需減量，嚴重腎功能損害者應延長給藥間隔或調整劑量。當內生肌酐清除率為10～50mL/min時，給藥間期自8 小時延長至8～12小時或給藥間期不變、劑量減少25%；內生肌酐清除率小于10mL/min時，給藥間期延長至12～18小時或每次劑量減至正常劑量的25%～50%而給藥間期不變。
6、肌內注射時，每50萬單位青霉素鉀溶解于1mL滅菌注射用水，超過50萬單位則需加滅菌注射用水2mL，不應以氯化鈉注射液為溶劑，靜脈滴注時給藥速度不能超過每分鐘50萬單位，以免發生中樞神經系統毒性反應。