ACTH興奮試驗的試驗有多種試驗方法，如：一次肌注法，連續48h靜注法，二日靜滴法，五日靜滴法。常用后二種方法，腎上腺皮質功能亢進性疾病可用二日靜滴法，功能減退性疾病可用五日靜滴法。
ACTH興奮試驗的試驗的二日靜滴法：
1、試驗前1、2日留24h尿測定17-OHS、17-KS，或抽靜脈血測皮質醇、測外周血嗜酸性粒細胞計數作為對照，可根據當地實驗室條件選擇。
2、試驗日8：00排空膀胱，然后靜脈滴注ACTH，25u，溶于5%葡萄糖500ml-1000ml中，控制速度，于8h滴完，連續2日。
3、收集24h(小時)尿測17-OHS、17-KS，或于滴注完抽血測皮質醇，嗜酸性粒細胞。
ACTH興奮試驗的試驗的五日靜滴法： 試驗前準備工作、試驗方法，測定指標同二日法，唯時間延長到5日。 正常人ACTH興奮第1日尿17-OHS、17-KS排泄量比對照日升高1、2倍；第2日比對照日升高2、3倍，第3日比對照日升高3、4倍。血皮質醇較對照日升高2倍-4倍，嗜酸性粒細胞下降50%-80%。
ACTH興奮后上述參數較基礎值有變化為陽性反應。
對腎上腺皮質功能亢進可鑒別良惡性，對功能減退者可鑒別原發或繼發性，對女性男性化可鑒別病變部位在腎上腺還是性腺。