1.操作在X線透視下進行。病人仰臥于檢查臺上，皮膚常規碘酊、乙醇消毒，覆蓋無菌孔巾。
2.穿刺點在乳突尖下和后各1cm的一點，多采用右側。局麻后，用20或22號腰穿針，平行檢查床面，與頸椎垂直，緩慢穿入。在X線透視下將針尖由頸椎1～2椎弓間進入椎管后1/3。穿過寰椎后膜時有落空感，繼續前進穿過硬脊膜有第2次落空感，拔出針芯可見有腦脊液流出。如無腦脊液流出，再小心緩慢前進1～2mm，直至有腦脊液流出后，可再前進1～2mm，使穿刺針前端完全進入蛛網膜下腔。
3.腦脊液通暢流出后，即可連接測壓管測壓或收集腦脊液送檢。注入造影劑應在透視下進行，注意造影劑流向，以防誤注入硬脊膜下或脊髓內。調整體位，使造影劑流向需檢查處。