一類具有酶催化功能的內含子，轉錄成RNA后，可以自我剪接。此類內含子轉錄后可以形成9個由堿基配對形成的特定二級結構，分別命名為P1至P9，P1和P7是保守的。
I型內含子具有自我剪接的功能，在剪接反應中，要有一種鳥嘌呤核苷（含有游離的3'-OH）G-OH。G首先結合到內含子的5'端，當線性的內含子成為環狀時，其3'端可以距離5'端15個核苷酸以外，從而將原來的5'端和15個堿基（或以上）的節段（包括G）切除出去。這種自我剪接，是由RNA的特定序列的核酸內切酶的活性所催化。
Ⅰ型內含子比Ⅱ型內含子更普遍，這兩類內含子之間沒有什么關系，它們有一個共同的特性，就是在體外能夠自我剪接，而不需要任何蛋白質酶的催化。但是在體內它們卻都需要蛋白質幫助折疊成二級結構。
I型內含子存在于某些生物的細胞核、線粒體和葉綠體中編碼rRNA、mRNA和tRNA的基因中。