• <noscript id="yywya"><kbd id="yywya"></kbd></noscript>
  • 發布時間:2022-11-11 13:50 原文鏈接: 關于M13噬菌體的基本信息介紹

      M13噬菌體是一種絲狀噬菌體,內有一個環狀單鏈DNA分子,長6407個核苷酸,含DNA復制和噬菌體增殖所需的遺傳信息。M13DNA的復制起始位點定位在基因間隔區內。但是基因間隔區的有些核苷酸序列即使發生突變、缺失或插入外源DNA片段,也不會影響M13DNA的復制,這為M13DNA構建克隆載體提供了條件。

      其中M13mp系列對野生型M13加以改造,插入了多克隆位點和LacZ基因,可容納外源DNA300-400bp,可用于制備DNA測序時用的單鏈模板和核酸探針。

      M13 噬菌體的生物學 M13 噬菌體顆粒是絲狀的,只感染F+(含F質粒,能產生性菌毛)的大腸桿菌。感染宿主后通常不裂解宿主細胞,而是從感染的細胞中分泌出噬菌體顆粒,宿主細胞仍能繼續生長和分裂。但生長水平比未感染組低。

      M13 噬菌體的基因組為單鏈 DNA (+DNA),由 6407 的堿基組成。基因組 90% 以上的序列可編碼蛋白質,共有 11 個編碼基因,基因之間的間隔區多為幾個堿基。較大的間隔位于基因 Ⅷ 和基因 Ⅲ 以及基因 Ⅱ 和基因 Ⅳ 之間,其間有調節基因表達和 DNA 合成的元件。

      M13 噬菌體基因組可編碼 3 類蛋白質,包括復制蛋白(基因 Ⅱ,Ⅴ 和 Ⅹ),形態發生蛋白(基因Ⅰ,Ⅳ 和 Ⅺ),結構蛋白(基因 Ⅲ 、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ 和 Ⅸ)。所有結構蛋白在形態發生之前都插入在宿主細胞的質膜中。基因組 DNA 為正鏈,按基因 Ⅱ 至基因 Ⅳ 方向合成,與噬菌體的 mRNA 序列同義。

      在宿主細胞內,感染性的單鏈噬菌體 DNA (正鏈)在宿主酶的作用下轉變成環狀雙鏈 DNA ,用于 DNA 的復制,因此這種雙鏈 DNA 稱為復制型 DNA (replicative form DNA) ,即 RF DNA 。通過 θ 復制方式, RF DNA 進行擴增,基因的轉錄也隨即開始。基因組中的任意一個啟動子都可以啟動基因的轉錄,單方向地終止于下游的終止子。啟動子和終止子的位置關系使得靠近終止子的基因轉錄更頻繁。

      當基因 Ⅱ 蛋白在親代 RF DNA 的正鏈特定位點上產生一個切口時,便啟動噬菌體基因組進行滾環復制。此時,在大腸桿菌的 DNA 聚合酶 Ⅰ 的作用下,以負鏈為模板在切口的 3' 末端加入核苷酸,并持續 DNA 的合成,用新合成的 DNA 替換原有的正鏈。當復制叉環繞模板整整一周時,被取代的正鏈由基因 Ⅱ 產物切去,經環化后形成單位長度的噬菌體基因組 DNA 。在感染開始的 15~20 分鐘內,這些子代正鏈在宿主細胞酶的作用下,又轉變成 RF DNA ,然后以之為模板繼續轉錄并繼續合成子代正鏈 DNA 。當感染細胞內累計有 100-200 個 RF DNA 時,細胞內也產生了足夠的單鏈 DNA 結合蛋白,即基因 Ⅴ 蛋白。該蛋白可以抑制翻譯活性,特別是抑制基因 Ⅱ mRNA 的翻譯,并且強烈地結合在新合成的正鏈 DNA 上,阻止其轉化成 RF DNA 。此時, DNA 的合成幾乎只產生子代正鏈 DNA 。另外,基因 Ⅹ 蛋白和基因 Ⅴ 蛋白也是噬菌體特異 DNA 合成的強力抑制子,從而限制感染細胞內 RF DNA 的數量。結果,感染細胞內 RF DNA 的數目和子代正鏈 DNA 的產生速率都能保持適度。

      成熟噬菌體顆粒由 11 個病毒蛋白中的 5 個組成,至少 4 個其他蛋白(如基因 Ⅰ 、Ⅳ 和 Ⅺ 蛋白,以及宿主的硫氧還蛋白(thioredoxin)對噬菌體顆粒的組裝和分泌是必須的。

  • <noscript id="yywya"><kbd id="yywya"></kbd></noscript>
  • 东京热 下载