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  • 發布時間:2022-03-16 16:59 原文鏈接: 關于Th細胞檢測的酶聯免疫點法介紹

      Schauer等對胞內細胞因子的測定作出綜合評價,標本來源包括末梢血單個核細胞、腫瘤細胞、組織細胞等,檢測方法常用免疫組化法,主要為堿性磷酸酶抗堿性磷酸酶(APAAP)技術[6] 和測定mRNA的熒光原位雜交技術(FISH),此外還有顯微熒光法,將單個細胞用多聚甲醛固定,皂素滲透后,行間接免疫熒光染色,以及Schauer等[5]介紹的用刺激劑PMA(佛波酯)和Ionomycin刺激細胞,使細胞因子向高爾基體積聚,用BFA或Monensin阻斷細胞因子向胞膜外轉運,然后用流式細胞儀檢測的方法,總的來說 TH1型細胞因子的檢測相對容易,因為TH1型細胞能表達大量IL-2或IFN-γ,而TH2型細胞因子如IL-4、IL-5、IL-10的檢測相對困難,主要原因是TH2型細胞在標本中的出現頻率較低,所以有人建議用CD45RO+ 細胞來代替TH2的檢測 [6]。

      酶聯免疫點法

      (enzme-linked immunospot assay,ELISA)將抗細胞因子抗體包被反應板,加入待測T細胞,孵育一段時間后,加酶標記抗細胞因子抗體的酶作用底物,通過細胞的比色印跡法檢測信號,最后通過圖像掃描或專用的酶標儀進行分析。ELISPOT法引入生物素,親合素放大系統后,靈敏度大為提高,在測定產生細胞因子陽性細胞頻度方面,與流式細胞儀法相平行,但后者可同時描述細胞性質和其他因子的產生情況,且結果更為客觀,ELISPOT法一般雙ELISA夾心法靈敏,因為其充分利用細胞因子在細胞分泌部位聚集濃度高的特點,并且ELISPOT法能夠對每個細胞的分泌物定量。

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