1.核酸雜交
是最常用,最可靠的方法之一,可大規模地分析文庫的克隆子。
1.同源探針:至少含有所需cDNA克隆的一部分確切序列,常用于以一個部分克隆分離cDNA文庫中的全長克隆。
2.部分同源探針:探針的序列與所要篩選的cDNA克隆的序列相關但不相同,常用于克隆家族基因。
3.總cDNA探針:
通過反轉錄酶均勻摻入放射性核苷酸或通過總的或分級分離得到的poly(A)+mRNA進行末端標記而獲得cDNA探針。
cDNA扣除探針:
從第一種mRNA制備cDNA探針,連續多次與20倍過量的第二種mRNA雜交;
回收未雜交的cDNA探針,再與100倍過量的第一種mRNA雜交,使得原mRNA中的一些特異序列得到高度富集。
* 主要用于探測cDNA文庫中與調節水平有所差別的mRNA克隆。
合成寡核苷酸探針
2.特異性免疫學檢測
在cDNA表達文庫中,目的基因的表達產物能與特異性抗體發生免疫學反應,通過酶學的方法加以檢測。
3.cDNA克隆的同胞檢測
將cDNA文庫分成若干組含有10-100個克隆子的易于處理的亞cDNA文庫,對每組亞cDNA文庫進行檢測,當鑒定出陽性庫后再不斷將其分成更細的庫進行檢測,直到獲得陽性單克隆。
4.cDNA克隆的確證
cDNA克隆含有編碼某一特定蛋白質的完整氨基酸序列的開放讀框。