養細胞是一種什么樣的體驗

每天對待細胞比孝敬爹媽還用心，
那真是捧在手里怕碎了，
含在嘴里怕化了，
看在眼里怕丟了，
培養細胞時有哪些慘痛經驗教訓可以分享呢？ 

早走早脫身，從此專注黑生物

1. 嚴格無菌操作，多噴噴酒精，要是對滅菌的東西不放心，自己包自己送自己烘干。
2. 不要和別人共用試劑耗材，自己準備一套。
3. 有可能的話在拿到新細胞的時候做好支原體衣原體檢測。
4. 水浴鍋很臟，生化培養箱要是得手動加濕的話盤里的水也會很臟，勤換（滅菌水加進去）。
5. 晚上離開的時候給細胞房照紫外，超凈臺是用完就開。
6. 盡量的是同一時間就你一個人在用細胞房在養細胞。

非科班出身經驗分享

1. 別怕浪費。槍頭什么的只要有可能污染就換，如果用酒精燈就什么都稍微烤一下，別直接放到火上，離一段距離。
2. 動作要既輕柔又有力。動作太重會有一堆一堆的氣泡，動作太輕就吹不下來... 剛開始的時候吹細胞太痛苦了，稍微一下就起泡。后來就是吹的時候槍里的培養基不要一次全都壓出來，留一點，槍的頭部盡量深的在液面以下。
3. 離開過操作臺的東西再進操作臺之前一定要用酒精噴一遍，包括一切實驗耗材、儀器、以及你帶著手套的手。
4. 實驗結束后對實驗臺的消毒。紫外什么的，用前用后都照個 30 分鐘。
5. 身體的各個部分盡量的少接觸不需要接觸的地方的地方。比如實驗臺，又比如培養箱內部。
6. 細胞的密度根據細胞的性質、傳代的時間以及自己的心情來定。培養基的話多多不要超過 2 天就要換一次。細胞可以不傳代，但是培養基是一定要換的。
大概就是，不該碰的地方不碰，有影響的地方少碰；該使勁的時候不含糊，不該使勁的地方一定忍住。如果是比較簡陋的操作臺就一定要擺個酒精燈，所有操作緊密圍繞在酒精燈周圍進行。如果是高級臺子就多用酒精噴噴。感覺生物的實驗，心疼錢就還是不要做了。

換種心情，好好生活

1. 培養細胞前，可以看看細胞特點說明書，包括細胞正常生長的狀態圖、傳代、培養基的類型等。
2. 不同細胞生長周期不同，有的生長很快，比如說 MDA-MB-231，傳代的時候取離心懸液的十分之一就已經足夠了，有的又是特別慢，等的人心焦，BT474 就是，傳代是一分二，復蘇起始的時候兩周多才能長滿，所以就要在培養細胞的過程中多多摸索了。
3. 對于嬌弱的細胞，就得細心呵護了，胰酶消化不能過久，吹得時候要輕柔，離心時候也要注意轉速和時間，每天都要去看一下細胞，肉眼觀察培養基狀況、顯微鏡下觀察細胞生長狀況。
4. 凍存細胞復蘇后第二天更換一次培養基。
5. 培養箱隔一段時間徹底用酒精棉擦洗一次。
6. 養細胞大的教訓：不能偷懶！

細胞虐我千百遍，我待細胞如初戀

1. 不管買的細胞、惠贈的細胞，剛拿到手趕緊做兩件事：檢測是否有支原體污染；迅速擴增凍存。
2. 發現有污染迅速處理掉，特別是當你養了很多種細胞時；細菌污染，真菌污染很容易發現，支原體污染的話，細胞會長的慢，買個支原體檢測的 kit 定期檢測一下。
3. 細胞房日常的值日清潔是必須的，此外還要定期熏蒸。
4. 細胞的傳代一定要規律，保持相同的 confluency 和傳代時間間隔，不要隨心所欲或者拖延。
5. 注意個人衛生。

靠內心感動細胞

1. 自己的細胞自己養，血的教訓。
2. 在生物安全柜（或者超凈臺），槍頭，血清管，血清，培養基，瓶子都足夠好，并且細胞房有良好的衛生措施（比如隔離服，手套，kou罩，清潔，HEPA 等等）且不違法操作原則的情況下，你其實很難污染。
3. 上述條件不完備的情況下，就要多注意無菌操作了：比如要用的東西提前拿到臺子里照啊（不過這個其實也不大好，因為會擋住紫外線），使用前 SDS+酒精擦臺子，進出超凈臺一定要酒精擦手。
4. 少對細胞說話，多靠內心來感動它們（是的！心不誠是不可以的!）至少 1 天看 1 次。

 細胞養不好，自掛東南枝

1. 好的潔凈室，空調系統跟得上。
2. 好的生物安全柜，硬件跟的上。
3. 瓶子移液器吸頭大都是進口，耗材跟的上。除了這些就是自己的操作習慣了。
4. 任何東西不要從敞開的瓶口上面經過。
5. 雖然酒精燈會干擾安全柜氣流但是還是需要一盞用來勤燒瓶口。
6. 實驗時所用材料的位置擺放要順手，污染源和已滅菌物品要分開放置。

養細胞就像打仗

細胞飼養涵蓋的內容太廣了，而且不同種類細胞的飼養難度以及技術要求不同，腫瘤細胞，成纖維細胞，上皮細胞... 甚至各類干細胞... 每一種都有自己的生長要求。如果只是單純的一般性操作，大同小異，個人覺得練好技術的情況下注意幾點就好：

1. 各種無菌，從培養基到操作過程再到培養箱，時刻注意無菌。本人曾經所在的實驗室出現過大規模污染并終導致所有細胞集體毀滅... 教訓慘痛。
2. 培養基的配制一定要做好梯度摸索并詳細記錄，否則細胞死都不知道怎么死的。
3. 盡量提高操作熟練度，減少培養皿在培養箱外的滯留時間，細胞很脆弱，經不起折騰，不像人，熱了有空調，冷了能烤火。
4. 把握好培養基更換的時間，不同細胞類型時間不同，早了浪費試劑，晚了可能全軍覆沒。
5. 經驗很重要，養細胞的很多經驗你是無法在公開的書籍和資料上找到的。多向實驗室前輩學習，他們會讓你少走很多彎路，真的。
養細胞就像打仗，知彼知己，百戰不殆。只有了解你養的對象，才能把他養好。

細胞就是矯情

養細胞細胞這個東西呢有的時候真說不清。養過一段時間的巨噬細胞，一開始操作各種謹慎小心，隨時默念各種無菌原則，培養基什么的都用的進口的，但細胞還是萎靡不振，兩個多星期過后實在懶得管，換液等操作也很隨意的草草進行，酒精也懶得噴，結果這貨卻開始瘋長，過了幾天居然達到一天要傳一次代，而且數量甚至可以一傳三， 所以說，有的細胞就是矯情。