1.預處理取新鮮組織塊，大小為1.5～3～5mm，用2.5%戊二醛固定1～3小時。為防止冰晶形成，用30%甘油生理鹽水浸泡8～12小時。 2.冷凍斷裂是在冷凍條件下使樣品變得又硬又脆，用刀劈裂樣品，暴露觀察面。因為是用刀劈裂的樣品，斷裂往往發生在細胞被凍結后較脆弱的部位，多數是沿細胞及細胞器的膜裂開。由于斷裂面是凸凹不平的，所以圖像立體感強。冷凍斷裂時，刀的作用在于劈裂，而不是切割，所以刀刃不必鋒利，但不能有缺口、油污和水份，還需保持清潔干燥。冷凍復型的斷裂操作要在真空中進行，是因為真空對熱傳導性差，能使樣品較長時間維持在較恒定溫度下進行斷裂操作，同時也便于進行下步的蝕刻處理。