冷凍血漿中凝血指標的測定與分析

【摘要】  目的 為了解和掌握FFP中血液凝血指標的含量及活性對臨床具有重要意義。方法 對湖南省永州市中心血站提供本院的FFP隨機抽查20份/袋/2U，進行了部分凝血指標的含量測定與分析。結果 從本凝血指標測定與分析中發現仍有少量血液凝血因子未能達到正常要求，如：APTT超出正常范圍（＞35s）2例（10％），PT超出正常范圍（＞14s）1例（5％），Fib低于正常范圍（＜2g/L）11例（55％）。結論 FFP含有正常人血漿中大部分凝血因子，這是其他血液制品不能替代的。為確保FFP更有效準確地對疾病進行治療，我們對血站提供的FFP進行抽查，一方面可以反饋信息，使中心血站在制備FFP時能嚴格從各個制備程序及環節上把關，嚴把質量控制；使FFP產品更好地為臨床醫療服務。

【關鍵詞】  冷凍血漿； 凝血指標；PT、APTT、TT、Fib測定

臨床上手術前要以APTT、PT和血小板計數三項項目檢查作為出血傾向的診斷指標。我國在2000年衛生部出臺凝血項目改革中指出，為了避免術中出血，手術前進行出血傾向的檢查是非常必要的，由于影響止血的因素很多，但又不可能做許多實驗，因此，以往常規中用出血時間和凝血時間作為診斷指標，結果異常時再進一步做較復雜的試驗尋找病因。

    近年來眾多文獻報道手工法APTT的參考值男性為31.5～43.5s，女性為32～43s。兩者差異無顯著性。受檢查的測定值較正常對照延長超過10s以上才有病理意義。

    手工法PT參考值為11～14s，超過正常對照3s為異常，PTR參考值為1±0.15。因儀器、試劑的不同，會得到不同的結果，因此儀器法很難規定統一的參考值，各實驗室應根據自己的儀器、試劑等條件，自行測定一批健康人，建立參考值。此后至少每年或條件有變化時，根據新的條件，重新建立參考值。至少選擇40名18～55歲之間男性及非妊娠、月經期女性（男女各半）身體健康，半月內無服藥史，在平靜休息的狀態采血且分開幾天采血和測定（以減少批間差異）。在常規檢測標本的條件下進行試驗。

    但由于FFP（freh frozenplasma，FFP）仍是目前臨床預防和治療出、凝血功能障礙的重要血制品之一，因此，我們為了解和掌握FFP中血液凝血指標的含量及活性對臨床具有重要意義，我們對湖南省永州市中心血站提供本院的FFP隨機抽查20份/袋/2U，進行了部分凝血指標的含量測定與分析，現將測定結果報告如下。

    1  資料與方法

    1.1  資料來源  20份冷凍血漿均自血液采集后（于ACB-B抗凝全血分離放入-50℃速凍制備而成，保存于-30℃后備用）來自于本市中心血站。

    1.2  儀器設備  （1）檢測儀器為SYSMEX CA-530型全自動血凝分析儀，由日本東亞提供。（2）檢測儀器為BE compactX全自動血凝分析儀，由德國BE公司提供。（3）試劑由美國Dade-Behring公司生產提供。PT、APTT、TT、Fib試劑；（4）試劑由北京世帝科學儀器公司生產提供。PT、APTT、TT、Fib試劑；（5）質控品由北京世帝科學儀器公司，批號為STG 10504-6，有效期080801；美國Dade-Behring生產提供。批號為354-612X，有效期20090701。

    1.3  方法  隨機分批抽取FFP 20人份，37℃水浴融化，融化后立即在凈化工作室內按無菌技術抽取血漿2ml，嚴格按照儀器和試劑說明書要求，樣本測試：每天最多測試10例樣本，每例樣本可同時測試多個項目；同一樣本在兩臺儀器上的測定時間間隔<2h。每種分析物在每臺儀器上均重復測定2次，2次測定的順序完全顛倒。例如：某分析物當天共有10個樣本，第1次測定順序為1、2、3、4、5、6、7、8、9和10號，則第二次的測定順序必須為10、9、8、7、6、5、4、3、2、1，這樣可以消除交叉污染及在一批內雙份測定結果均值的偏移；按直線回歸方程進行數據統計，計算相關系數。

    隨即在已調好的CA530及德國BE compactX自動血凝分析儀上同時測定。對不同的檢測項目采用不同稀釋度標準血漿凝結時間與相應的凝血因子活性率取對數后標繪于對數圖上，再繪制成標準曲線。然后測定受檢者血漿凝結時間與相應因子活性率所獲數據然后按內插法帶入回歸方程，計算受檢者血漿中凝血因子活性水平。

　2  結果

    測定項目PT、APTT、TT、Fib結果見表1。表1  FFP凝血因子測定結果

    3  討論

    因血漿中不穩定的凝血因子（如FⅧ）其在體外半衰期較短，多為8～12h，其活性易喪失，加之血液離體后血漿凝血因子接觸異物表面會不同程度被激活而使之失活［1］。所以在FFP制備的同時，應盡量縮短FFP在室溫的停留時間，在制作采血標簽時，將即刻時間打印在標簽上，以便在成分分離血漿時，保證在6h內把FFP放入-50℃冰箱中保存，速凍血漿是保存血漿內各種有效蛋白成分及生物活性因子的重要條件［2］。

    本資料凝血因子測定指標有：PT（凝血酶原時間）試驗，采用國際標準化比值來表示；APTT（活性部分凝血酶原時間）試驗，是用于內源性凝血因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ活性異常的篩選；TT（凝血酶時間）試驗，是用于快速評定止血和血栓形成的有效方法，可以定量監測功能性纖維蛋白原（Fbg）水平及因子含量的降低。

    從本凝血指標測定與分析中的各類血液凝血因子平均水平均在正常參考值范圍之內，說明市中心血站在制備血漿過程中能嚴格執行衛生部技術規范要求，基本可達到臨床治療量的目的，有能保證對不穩定因子的替代治療作用。但從本凝血指標測定與分析中發現仍有少量血液凝血因子未能達到正常要求，如：APTT超出正常范圍（＞35s）2例（10％），PT超出正常范圍（＞14s）1例（5％），Fib低于正常范圍（＜2g/L）11例（55％），從本凝血指標測定與分析中的變化是否有待我們從血漿制備或血源質量進一步探討其原因。

    目前，成分輸血在臨床醫學應用廣泛，特別是針對無相應的血液成分濃縮物可治療的疾病或多種凝血因子缺乏的患者，采用輸注FFP進行治療，原因是FFP含有正常人血漿中大部分凝血因子，這是其他血液制品不能替代的。為確保FFP更有效準確地對疾病進行治療，我們對血站提供的FFP進行抽查，一方面可以反饋信息，使中心血站在制備FFP時能嚴格從各個制備程序及環節上把關，嚴把質量控制；使FFP產品更好地為臨床治療服務。

【參考文獻】
  1 中華人民共和國衛生部.中國輸血技術操作規程（血站部分）.天津：天津出版社，1997，16-17.

2 叢玉隆.儀器對凝血酶原時間國際標準化比值的影響及校正