（一）正向間接血凝試驗
將綿羊紅細胞或人的“ O”型紅細胞用醛類固定（稱為醛化，可改變血球表面性質，使其易于吸附蛋白質類抗原，并可長期保存使用），再將可溶性抗原吸附于醛化的血細胞上，制成抗原致敏的紅細胞，當與相應的抗體結合，使紅細胞被動的聚合在一起，出現肉眼可見的凝集現象，常用于檢測傳染病抗體或自身抗體。
【 實驗材料 】
（ 1）抗原制備：將傷寒桿菌接種在培養基上，37oC培養24小時，用生理鹽水洗下，100oC水浴2小時，離心棄上清，稀釋后備用。
（ 2）致敏紅細胞的制備：取稀釋的抗原與等體積的已醛化的2%SRBC混合，37oC水浴2小時，每隔15分鐘振搖一次，取出后洗滌棄上清，稀釋成0.5% 備用。
（ 3）試管、試管架、刻度吸管、恒溫水浴箱。
【 實驗方法 】
（ 1）取8支小試管排列于試管架上，依次編號。每管加入0.25ml生理鹽水。于第1管內加入1:10稀釋的免疫血清0.25ml混勻，倍比稀釋至第7管。第8管為陰性對照。
（ 2）每管中加入0.25ml致敏綿羊紅細胞，振搖試管架，使之充分混勻。
（ 3）將試管架靜置于37oC恒溫水浴箱中1小時。
正向間接血凝試驗操作程序
【 結果分析 】
（ 1）首先觀察陰性對照管，應無凝集現象，管底紅細胞沉積呈圓形，邊緣整齊，輕輕搖動則沉積菌分散均勻呈混濁現象。
（ 2）觀察實驗管，凝集現象可根據強弱程度，分為五級：
++++ 細菌全部凝集，管底形成大片凝集物。
+++ 細菌大部分凝集，管底的片狀凝集物較小而薄。
++ 約半數的細菌發生凝集，管底出現凝集環。
+ 僅有少部分細菌凝集，管底可見沉積的細菌周邊有稀疏、點狀的凝集物。
— 液體混濁，無凝集。
（ 3）血清抗體效價的判定：以出現明顯凝集現象（++）的血清最高稀釋度作為受檢血清的抗體效價。
【 注意事項 】
? 紅細胞需來自同一個體、批號相同，且致敏血球應新鮮配置。
? 使用器材必須清潔，否則對結果有很大影響。
（二）反向間接血凝試驗
將特異性抗體吸附于醛化的紅細胞上，再與相應抗原結合，在適量電解質存在條件下，紅細胞被動聚集出現肉眼可見凝集現象。用于檢測標本中的相應可溶性抗原。
【 實驗材料 】
（ 1）1:20抗—HBs致敏的醛化血球、純化的1:20抗—HBs、待檢血清、稀釋液。
（ 2）“V”型微量血凝板，0.025ml稀釋棒、微量攪拌器、刻度吸管、滴管（40滴/ml）。
【 實驗方法 】
（ 1）配制致敏血球懸液 于每瓶凍干診斷血球加4ml稀釋液，輕輕旋搖使成均勻血球懸液，濃度約為0.6%。
（ 2）正式試驗
① 在“V”型微量血凝板上，每份待檢血清設立8孔，于各孔內用40滴/ml滴管各加1滴稀釋液（相當于0.025ml）。
② 用0.025ml容量的稀釋棒蘸滿待檢查血清分別依次在各孔內捻轉作倍比稀釋（一般每孔內均需捻轉10次左右），直至第7孔，第8孔為致敏血球對照。另設第9孔為陽性對照，加0.025mlHBsAg陽性血清。
③ 于每孔中加0.025ml混勻的致敏血球懸液。
④ 將血凝板置于微型振蕩器上振蕩1~2分鐘，置37oC1小時后觀察結果。
反向間接血凝試驗操作程序
【 結果分析 】
不凝集：紅細胞全部下沉，集中于孔底，形成致密的圓點。
明顯凝集（++）：紅細胞于孔底形成薄膜狀凝集，中央可見疏松的紅點。
出現明顯凝集的血清最高稀釋度為 HBsAg效價，凡效價≥1:16者需進一步做中和試驗。
中和試驗
在血凝板上每份標本設測定排與對照排，每排
8孔。于每孔加稀釋液0.025ml，用2支稀釋棒蘸取被檢血清，分別在2排作倍比稀釋到第7孔，第8孔不含血清，為血球對照，然后，于測定排各孔加稀釋液0.025ml，對照排各孔加1:20抗HBsAg0.025ml，血凝板振蕩1~2分鐘，置37oC30分鐘。取出，于各孔加0.025ml致敏血球，振搖混勻，置37oC1小時后觀察結果。
凡正式試驗效價≥ 1:16，且中和試驗的對照排凝集孔數至少低于測定排凝集孔數2孔者，為HBsAg陽性，否則系非特異性凝集。
【 注意事項 】
（ 1）配制的致敏血球懸液一般當天用完，若置2~10oC，使用期不超過3天。
（ 2）試驗用的血凝板、滴管、稀釋棒等器材必須十分清潔，否則易造成非特異性凝集。
? 血凝板、稀釋棒用后均需用次氯酸鈉（ 10%v/v）浸泡過夜；滴管需煮沸10分鐘，然后用水沖凈，再用蒸餾水沖洗，晾干備用。