分配色譜(partition chromatography)
原理: 主要基于樣品分子在流動相和固定相間的溶解度不同(分配作用)而實現分離的液相色譜分離模式。
鍵合固定相:
分配色譜原本是基于樣品分子在包覆于惰性載體(基質)上的固定相液體和流動相液體之間的分配平衡的色譜方法,因此也稱液-液分配色譜。因為作固定相的液體往往容易溶解到流動相中去,所以重現性很差,不大為人們所采用。后來發展起來的鍵合固定相以化學鍵合的方法將功能分子結合到惰性載體上,固定相就不會溶解到流動相中去了。這種化學鍵合型固定相是當今HPLC最常用的固定相,大約占HPLC固定相的四分之三。
極性鍵合固定相: 鍵合在載體表面的功能分子是具有二醇基、醚基、氰基、氨基等極性基團的有機分子。
非極性鍵合固定相:
鍵合在載體表面的功能分子是烷基、苯基等非極性有機分子。如最常用的ODS(Octa Decyltrichloro
Silane)柱或C18柱就是最典型的代表,它是將十八烷基三氯硅烷通過化學反應與硅膠表面的硅羥基結合,在硅膠表面形成化學鍵合態的十八烷基,其極性很小。
正相HPLC(normal phase HPLC): 是由極性固定相和非極性(或弱極性)流動相所組成的HPLC體系。其代表性的固定相是改性硅膠、氰基柱等,代表性的流動相是正己烷。吸附色譜也屬正相HPLC,早期的液相色譜中曾廣泛采用這種體系。對于一些在非極性疏水固定相中強烈保留的有機分子常常采用正相HPLC模式。
反相HPLC(reversed phase HPLC): 由非極性固定相和極性流動相所組成的液相色譜體系,與正相HPLC體系正好相反。其代表性的固定相是十八烷基鍵合硅膠,代表性的流動相是甲醇和乙腈。是當今液相色譜的最主要分離模式,幾乎可用于所有能溶于極性或弱極性溶劑中的有機物質的分離。
凝膠色譜(gel chromatography)
固定相: 化學惰性的多孔性材料,如聚苯乙烯凝膠、親水凝膠、無機多孔材料。
流動相: 在凝膠色譜中,流動相的作用不是為了控制分離,而是為了溶解樣品或減小流動相粘度。
凝膠過濾色譜(gel filtration chromatography, GFC): 以水或緩沖溶液作流動相的凝膠色譜法。主要適合于水溶性高分子的分離。
凝膠滲透色譜(gel permeation chromatography, GPC): 以有機溶劑作流動相的凝膠色譜法。主要適合于脂溶性高分子的分離。如甲苯和四氫呋喃能很好地溶解合成高分子,所以GPC主要用于合成高分子的分子量(分布)的測定。