王錦恒 鄧梅英 541001 桂林醫學院附院
關鍵詞 抗-HIV 質量控制 臨界值 質控血清
ELISA 是目前公認的抗-HIV 較佳的篩選方法[1]，但在實際工作中，筆者發現ELISA抗-HIV的檢測受諸多因素影響，有系統誤差（包括試劑盒質量問題 、移液器標定與否、酶標儀讀數的準確性 、冰箱水浴箱溫度的波動及環境溫度等）和隨機誤差（由于工作人員操作不規范造成，如加樣不準甚至漏加或誤加等），導致檢測結果出現較大偏差。在日常抗-HIV檢測過程中設立空白、陰陽性對照且通過陰陽性對照值計算出臨界值（Cutoff）,被檢標本超出該值即為陽性。因此，在實驗中加入一個質控物（臨界值質控血清）對實驗進行動態質控，建立較為完善的質量控制|檢驗地帶網|體系是非常必要的，鑒于目前市售定值臨界血清較為昂貴，而用陽性血清滅活作為定值血清存在著潛在危險，HIV初篩實驗室如何獲得價廉安全的質控血清，筆者采用陽性對照血清自制臨界血清，在實踐中取得了較為滿意的效果。
1. 材料與方法
1.1 材料（1）試劑 抗-HIV ELISA試劑盒，抗-HIV陽性血清由新創（廈門）科技有限公司提供，批號：20050361 （2）儀器 美國寶特Bio-Tek ELX800型全自動酶標儀,ELX50全自動洗板機,電熱三用水箱。
1.2 方法 收集大量ELISA試劑盒中抗-HIV陽性對照，將之混合然后按1：1 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 稀倍比稀釋，并測定OD值，以超過試劑盒臨界值（Cutoff）約一倍的稀釋度（1：16）作為稀釋濃度對陽性對照品進行稀釋。將稀釋好的血清進行分裝，每支200微升，注明名稱批號置于 -20℃ 冰箱保存，沒天檢測樣品前取一小融化后充分混勻。嚴格按試劑盒說明書操作，取連續20天，得到20個OD值和Cut off值計算S/CO值的平均值(X)標準差（S）及變異系數（CV），對數據進行異常值檢驗，如果發現異常值，將此數據剔除，再重新計算余下數據的均值和標準差。
2. 結果
2.1 計算20個測定值S/CO值的相關值：X = 1.91, S= 0.155, CV=8.1％
2.2 繪制質控圖[2]：用Levey-Jennings 質量控制方法，繪制質控圖。以 S/CO值為縱坐標，以次數或日期為橫坐標，建立以均數為中心線，以X±2S為警告線（用紅線畫出），以X±3S為失控線（用藍線畫出），作出該批次試劑的質控圖框架，每天將隨患者樣本測定的質量控制物結果標在質量控制框架上，將它們連成線即為質量控制圖。
2.3 實驗質控的建立，在每次實驗中，嚴格按試劑盒說明書操作，設定空白
陰﹑陽性對照孔，將臨界值質控血清與實驗標本一同測定。實驗結束后算出質控血清的S/CO值，在質控圖上找到其相應位置，如果該點落在X±2S范圍內，本次實驗有效，可發出報告。如果在X±2S范圍外，則認為存在顯著性誤差，本次實驗無效，查找原因，重做本實驗。
3. 討論
艾滋病是一種危害較大的傳染病，近年來我國發現的HIV感染者和AIDS患者逐年增加，《 中國遏制艾滋病行動計劃（2001—2005）》 明確指出，我國目前已經進入HIV感染的快速增長期[3],且艾滋病已由高危人群向普通人群擴散。為防漏檢誤檢建立外部質控尤為重要。在商品試劑盒內僅配有陽性、陰性對照樣品（內部對照）是不夠的，為此，建立外部質控（外部對照）以監測本次試驗的穩定性，重復性，準確性及提示樣品|檢驗地帶網|處于臨界狀態時的檢驗操作情況十分必要。由于ELISA法靈敏度高，在加樣 、溫育、洗滌 、顯色讀數等步驟中出現任何誤差，則可使臨界值結果發生較大變化，而同批樣本可發生同樣的變化，特別是OD值靠近臨界值（Cut off值）或一些處于灰區的樣本[4]有可能被錯定為假陽性或假陰性。特別要注意向負值偏移的同批樣品，可能導致假陰性結果，造成漏檢.。
作為初篩ELISA法實驗室抗-HIV檢測質控的建立，筆者在嚴格按照說明書操作，在最佳條件下獲得20個OD值，這些值呈正態分布，其變異系數為8.1％,說明該血清具有良好的重復性；X±S(1.755～2.065)可信區間為68％，
X±2S(1.6～2.22) 可信區間為95％,X±3S(1.445～2.375) 可信區間為98％。選擇X±2S 作為限定外部對照的可接受范圍，落在X+2S(1.6～2.22)以外的外質控值將認為實驗失效。這一質控標準僅對該批試劑是確定的，在改變批號以后必須重新使用該血清制定相應的質控標準。
參考文獻
1 鄒雄 關于免疫學質控問題的討論。中華醫學檢驗學雜志，1992；16：218
2 鄭懷競 韓松. 臨床檢驗ELISE指南. 北京醫科大學 、中國協和醫科大學出版社，1994；53
3 王德文 劉赴平，臨床輸血與檢驗，2005；7（1）：53~54
4 文進 張斌 吉天鵬 李兵 李惠成 劉蘭 王佑珍,臨床輸血與檢驗, 2005;7(2):121