實驗方法原理 用 PCR 分析酵母菌落時，無需純化 DNA。本方案以單個酵母菌落的粗裂解液作為 PCR 擴增的模板，來確定 YAC 中是否攜帶目的 DNA 序列。
實驗材料 Taq DNA 聚合酶寡核苷酸引物DNA 標準參照物YAC 重組子的酵母菌株
試劑、試劑盒 PCR 緩沖液dNTP 溶液
儀器、耗材 瓊脂糖凝膠或聚丙烯酰胺凝膠微量離心管程控式 PCR 儀
實驗步驟
一、材料
1. 緩沖液和溶液
10X 菌落 PCR 緩沖液
dNTP 溶液（10 mmol/L), 含有 4 種 dNTP ( pH 8.0，PCR 級）
MgCl2 ( 25 mmol/L)
2. 酶及其緩沖液
Taq DNA 聚合酶
3. 凝膠
瓊脂糖凝膠或聚丙烯酰胺凝膠
4. 核酸和寡核苷酸
寡核苷酸引物
DNA 標準參照物
5. 專用設備
微量離心管（0.5 ml)
儲存有所需 PCR 方案的程控式 PCR 儀
6. 載體和酵母菌株
攜帶有目的 YAC 重組子的酵母菌株
二、方法
1. 在一個無菌的 0.5 ml 微量離心管里，依次序加入下列物質：10X 菌落 PCR 緩沖液 2 μl，25 mmol/L MgCl2 1.2 μl，10 mmol/L dNTPs 0.4 μl，寡核苷酸引物 每個引物濃度為 10 pmol，Taq 聚合酶 5 單位（0.2 μl），H2O 加至總體系為 20 μl。
2. 用一個黃色的一次性移液器吸頭，吸取少量酵母菌落 ( 0.10~0.25 μl )，加入反應體系。
3. 將 PCR 管放進 PCR 儀內。按下面程序進行 PCR 反應。
4. 用瓊脂糖凝膠或聚丙烯酰胺凝膠電泳分析 PCR 產物。電泳應采用適宜大小的標準參照物。