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  • 發布時間:2019-09-13 15:05 原文鏈接: 制備電泳實驗

    • 洗脫

    • 連續電泳

    • 等電聚焦制備電泳

               

    實驗方法原理 嚴格來說洗脫不能達到制備的目的,它只能得到微克到毫克級的樣品。通常是用其他方法分離的粗樣品通過某種電泳方法進一步分離純化后,再用擴散洗脫或電泳洗脫收集純樣品,繼而用作其他分析的需要。
    實驗材料

    凝膠切片

    儀器、耗材

    解剖刀 勻漿器

    實驗步驟

    1. 擴散洗脫

    擴散洗脫是用解剖刀或勻漿器將凝膠切片搗碎,以增加凝膠的表面積,然后用大約 3 倍體積的合適的緩沖液浸泡。如果蛋白對溫度不敏感,則可在 37℃ 或更高溫度下保溫,以改善洗脫的效果。對大體積的緩沖液雖然能得到良好的產率,但洗脫后樣品稀釋倍數太大,難以回收。洗脫后的凝膠碎片可簡單地用離心方法除去。

    2. 電泳洗脫

    電泳洗脫通常是用一定的裝置從某種電泳分離后的凝膠中電泳洗脫蛋白質,并分別移入小室中再收集。

    不管是擴散洗脫還是電泳洗脫,電極緩沖液和洗脫緩沖液的 pH,離子強度,凝膠的濃度和厚度,電壓梯度,收集物質的量,洗脫緩沖液的體積和操作溫度都影響洗脫效果。

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