刺激隱核蟲核酸檢測試劑盒（一管式恒溫熒光法）使用... 分析測試百科網wiki版

刺激隱核蟲核酸檢測試劑盒（一管式恒溫熒光法）使用說明

說明

動物疫病檢測系列基于獨特的恒溫熒光檢測技術，可針對食品、動物組織等樣品中病原的特異核酸片段進行擴增，通過實時擴增曲線判定結果。本產品用于刺激隱核蟲的檢測，檢出限為10³copies/μl基因組DNA。

◆ 產品組成（96測試）

◆ 適用儀器

Dhelix-C、ESE Tube Scanner、Genie II、Deaou-308C等恒溫熒光檢測儀，ABI 7500，LightCycler480，CFX 96等熒光PCR儀。

◆ 自備耗材和儀器

①滅菌1.5mL或2.0mL離心管；②冰盒；③移液器（0.1-2.5μL，0.5-10μL，10-100μL，100-1000μL）及配套滅菌吸頭；④離心機；⑤渦旋混勻器；⑥金屬浴

◆ 注意事項

1．本試劑檢測靈敏度高。為了防止污染，實驗要分區操作。

1）第一區：樣本制備區。

2）第二區：模板添加區。

3）第三區：擴增及產物分析區。

★分區之間最好進行物理性隔離，避免人為因素造成的污染。

2．實驗過程中穿戴工作服和乳膠手套，不同區域獨立使用工具，需更換手套和實驗服。

3．嚴格按照操作步驟操作，試劑配制和加樣等步驟請嚴格按照說明書要求在冰盒上操作。

4．反應液中的成分對光敏感，應避光保存。試劑使用前要完全解凍，但應避免反復凍融，推薦使用前離心30秒。

5．反應結束后，擴增管請置于密封袋內丟棄，當日清理，開蓋易造成氣溶膠污染，禁止開蓋。

6．不同批號試劑請勿混合使用，在有效期內使用。

◆ 樣品處理

參照《SC/T 7217-2014 刺激隱核蟲病毒診斷規程》或其他標準處理樣品，制備的樣本保存待用。

詳細步驟請按照標準操作或查閱食安通軟件。

◆ 實驗操作

1. 模板制備（樣本制備區）

建議使用配套水生動物病害基因組DNA提取試劑盒系列產品。

2．添加模板（模板添加區，放置于冰盒中進行）

取出所需測試數的已含有反應液的PCR管，將試劑完全解凍，解凍后打開管蓋向各管管底分別加入1μL B-I，蓋上管蓋離心1 min。打開管蓋分別沿各管管壁上加入2μL模板，順序為NG-I、待測樣品模板、PG-CI-I。蓋好PCR管蓋后，離心3 min，立即進行PCR擴增反應。

3. 擴增反應（擴增及產物分析區）

①恒溫儀器63℃條件下反應45 min。

②若使用熒光定量PCR儀，則熒光基團選擇FAM，淬滅基團選擇None，將63℃ 15 s，63℃ 45 s作為一個循環，于63℃ 45 s處收集熒光信號，45個循環。

其他儀器請參照儀器說明書進行設置。

◆ 結果判定

①儀器自動判定結果，若顯示“陽性”，則樣品中含有刺激隱核蟲；若顯示“陰性”，則樣品中不含有刺激隱核蟲或含量低于檢測限。如在40min~45min間出現曲線上揚而自動判讀結果為陰性，可能由于樣品含量較低導致，建議對樣品進行富集或延長反應時間至60min進行復核。

②在熒光定量PCR儀上，根據有無“S”型擴增曲線判定結果。若有“S”型擴增曲線，則樣品中含有刺激隱核蟲；若無“S”型擴增曲線，則樣品中不含有刺激隱核蟲或含量低于檢測限。