硝基咪唑類藥物在許多國家已被禁用，檢測肉類中的硝基咪唑類藥物殘留就變的尤為重要。本文使用全自動GVS系統處理雞肉樣品，經過自動GPC凈化和固相萃取，以LC-MS分析其中的硝基咪唑類藥物，大大減少和簡化了人工操作步驟。甲硝唑、氯甲基硝唑和苯并咪唑的回收率均在70%~130%之間，RSD均小于6%。
硝基咪唑類藥物（Nitroimidazoles） 主要用于預防和治療家禽的滴蟲病、豬的出血性下痢及厭氧菌感染，并具有促生長作用。是一類帶有硝基的咪唑化合物，其性狀為白色或淡黃色結晶，弱堿性，能和酸結合成鹽，遇光易分解，易溶于甲醇，微溶于水。該類藥物對哺乳動物具有致癌、致畸、致突變作用和遺傳毒性。常見硝基咪唑類藥物包括甲硝唑（Metronidazole）、氯甲基硝唑（5-Chloro-1-methyl-4-nitroimidazole）和苯并咪唑（5-Nitrobenzimidazole）等。這些藥物在動物體內通過C2側鏈的氧化而被快速代謝，代謝物與原藥具有相似的潛在毒性。因此，歐盟，北美和我國等都禁止了硝基咪唑在食品動物中的使用。
為了測定雞肉中的硝基咪唑類藥物，根據國際方法GB/T 21318-2007，對樣品進行前處理。這其中包含了很多步驟，如GPC凈化和固相萃取等，過程較為繁瑣。本研究使用美國LabTech公司全自動樣品前處理平臺，大大簡化了這個樣品前處理過程。平臺由GPC凝膠凈化系統、濃縮系統和SPE分離系統組成，即PrepElite-GVS系統，該平臺不但能滿足單一步驟的實驗需求，還可以實現多個步驟的在線聯機，明顯簡化了繁瑣的樣品前處理流程，減少了實驗室工作量，并且提高了工作效率，保證結果的平行性和準確性。該平臺具有良好的密閉性同時還具有溶劑回收功能，可保護操作人員免受有毒有害物質的危害，可廣泛應用于環境、食品檢測、農產品檢測、生命科學等領域。
本文使用PrepElite—GVS全自動樣品前處理平臺對雞肉中硝基咪唑類藥物殘留進行檢測，使繁瑣的前處理過程自動化，大大簡化了人工操作，并且可以得到較理想的檢測結果。
1、實驗部分
1.1儀器與試劑
PrepElite—GVS: AutoClean全自動凝膠滲析色譜凈化系統，附凝膠色譜柱Bio-Beads SX3，20×300mm；Sepline全自動固相萃取系統；LiqVap全自動定量濃縮系統（萊伯泰科有限公司，美國波士頓）；
LC-MS/MS 8030（島津，日本）；
C18固相萃取柱（LabTech，1000mg/6ml）；
硝基咪唑類藥物標準品：甲硝唑（純度≥99.5%），苯并咪唑（純度≥98%），氯甲基硝唑（純度≥97.5%）；
乙酸乙酯（分析純和色譜純）,環己烷（分析純）；氯化鈉（分析純），磷酸氫二鉀（分析純），無水硫酸鈉（分析純），甲醇（色譜純），所用水均為超純水。
1.2標樣和樣品處理
1.2.1標準溶液的配置
標準儲備液：分別稱取10.0mg標準品，用甲醇溶解并定容于10ml容量瓶中，該溶液濃度為1mg/ml，避光保存于-20℃。
混合標準中間液：分別吸取儲備液1 ml于10 ml容量瓶中，用甲醇定容，該溶液濃度為100μg/ml。
混合標準工作液：用水:甲醇=85:15的混合液稀釋混合標準中間液到合適的濃度。
1.2.2樣品配置
在超市購買新鮮的雞胸肉樣品切成小塊，勻質混勻，制成肉糜。
1.2.3樣品提取方法
稱取適量試樣，置于50ml離心管，加適量氯化鈉和磷酸氫二鉀，并用乙酸乙酯進行提取，超聲10min，離心，收集上清液；再加入乙酸乙酯重復提取一次。合并收集液，用無水硫酸鈉脫水，通過濾紙過濾。氮吹濾液，加入乙酸乙酯：環己烷（1:1）的混合液定容，供GVS凈化。
1.2.4樣品凈化方法
在PrepElite—GVS全自動樣品前處理平臺軟件上編制硝基咪唑類藥物的凈化方法如下。
GPC凈化條件：運行時間，25min；檢測波長，320nm；進樣體積，2.0ml；收集范圍，10.0min至20.0min。
濃縮條件：溫度，50℃；溶劑置換，GPC流動相轉為甲醇；定量濃縮終點體積，5.0ml。
SPE條件：活化，甲醇10.0 ml，流速3.0ml/min；氮氣吹掃：3s；上樣，體積4.0ml，流速3.0ml/min；洗脫，甲醇15.0ml，流速3.0ml/min；氮氣吹掃，15s。
二次濃縮條件：溫度，60℃；溶劑置換，甲醇轉為水：甲醇（85:15）；定量濃縮終點體積，5.0ml 。
1.3 LC-MS/MS的條件
液相色譜條件
色譜柱：VP-ODS 150 ×2mm，2μm；
柱溫：35℃；
流動相：A-0.1% 甲酸水溶液，B-甲醇；
流速為0.25ml/min，等度洗脫程序，A：B（85:15）。
質譜條件
電噴霧離子源正離子模式（ESI+）；
監測模式：多反應監測模式（MRM）參數，見表1；
脫溶劑管：250℃，加熱模塊：400℃；
霧化氣流速2L/min，干燥氣流速5L/min。
硝基咪唑類藥物標液（200ppb）GVS凈化后的TIC譜圖，見圖2。
2、結果與討論
采用加標樣品（加標濃度0.16mg/kg），經提取、GVS凈化處理，并用LC-MS/MS分析，計算加標回收率及相對標準偏差。3種硝基咪唑類藥物的回收率均在70%~100%之間，RSD均小于6%，見表2。
3、小結
本方法先對雞肉樣品中硝基咪唑類藥物殘留進行提取，并采用PrepElite—GVS（濃縮系統-GPC凝膠凈化系統-SPE分離系統）全自動樣品前處理平臺進行GPC和C18固相萃取柱凈化，最后用LC-MS/MS檢測其中的硝基咪唑類藥物殘留，3種硝基咪唑類藥物的回收率均在70%~130%之間，RSD均小于6%。實驗過程自動化程度高，操作簡單，結果顯示數據理想，可用于常規的雞肉中硝基咪唑類藥物殘留的檢測。