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  • 發布時間:2019-04-05 21:25 原文鏈接: 動物細胞培養——單層細胞的換液

    實驗方法原理目的

    給單層細胞換新鮮培養纂。

    應用

    用于給快速生長的培養物在傳代之間更換培養基,或從一種類型培養基換成另一種培養幕,

    訓練目標

    加強無菌操作技巧.介紹細胞維持的一個基本原理,即在持續培養周期中更換培養基。讓實習生觀察培養基并明白耗竭培養基的特征.例如細胞密度和(或)pH降低,并觀察有沒有污染.r解交叉污染的風險。比較冷藏的培養基是否需預溫。

    監督:向實習生說明耗竭培養革的特征.并示范操作吸取和更換培養幕。

    時間:30 min.

    背景信息

    更換培養篆(見13.6.2節);監控污染物(見19.4節);交叉污染(見19.5節).

    示范材料和操作:練習需要至少三瓶半數匯合的連續培養細胞系,如Hela或Vero細胞,并且要標明接種時間和數址。給實習生示范如何從冰箱取培養基,井要強調每個細胞系需特定培養基,而不能混聲U或操作。還要示范如何擦拭和整理超凈臺,牌箱的使用,將培養物放回解箱,用肉眼并在顯微鏡下觀察細胞的狀態(有無污染,是否需換液.艘康狀態)。示范如何抽取培養基和更換新培養基,這需要真空泵或廢液燒杯,如果有必要可以充5%c():。

    安全提示:如果操作人諫細胞.需要使用U級生物安全柜,丟棄的培養基中要加人消毒劑(見7.8.5節和表7.7)。




    實驗步驟

    練習

    概要

    吸取并丟棄舊培養基,更換新鮮培養基。

    標準方案

    給單層細胞換液(見方案13.1)。

    補充方案:完全培養基的制備(見方案11.7,11.8或11.9,以及練習3);pH標準色階的制備(見方案9.1);培養皿或板的操作(見方案6.3)。

    實驗變化

    在練習中更換了冷藏的和預溫的培養基后.接下來需要做細胞計數(見練習12)另一瓶培養物則不換液,而是同時川胰蛋白醉消化。

    背景:完全培養基(見方案9.5);換液(見13.6.2節)。

    數據

    比較已經更換了冷藏或預溫的培養基(在練習12中計數)與未換液的培養物之間外觀和生長的差異。

    日常維護需在記錄表中進行記錄(表12.5),并且把實驗數據填人練習12的表格。

    展開


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