| 實驗步驟 | 觀察一系列不同密度的細胞并攝影。
設備和材料
”培養瓶或培養皿中一系列不同密度的細胞，最好是同一正常或轉化細胞（例如，3T3和SV3T3，或BHK21一C13和BHKZI一PyY）的不同密度情況，包括中期（大約5()％匯合，有明顯的有絲分裂）、匯合（100％的生長面積覆蓋了細胞，但沒有堆積）和匯合后期（細胞長成多層，如果是轉化細胞就會堆積）。如果可能的話最好有低密度和高密度的懸浮細胞。
2）如果可能，最好有已污染的培養物樣本（最好不要是培養皿，以避免擴散的風險）和不健康的培養物，例如，很長時間沒有換液的細胞。
3）倒置顯微鏡，配有 4X, 10X , 20X 相差物鏡和聚光器。
4）自動相機，最好是帶監控器的數碼相機，或帶攝影目鏡的膠片相機。
標準方案
l）打開顯微鏡電源，調節燈光強度（見方案16.1）。
2）從孵箱中取出培養物。最好在同一時間檢查少量培養瓶，而不要將很多培養瓶長時間放在孵箱外。取出一對培養瓶，例如，低密度和高密度的同一細胞，或者同一細胞類型的正常和轉化狀態。
3）用肉眼觀察每一個培養物，注意培養基的混濁度、pH是否下降或分裂中的細胞。
努力辨識單層細胞，尋找圖像的特征。可以選擇正常形態，例如，成纖維細胞匯合時的旋渦圖案（圖16.Zb,h和彩圖sb）。
4）在倒置相差顯微鏡低倍鏡下觀察（4x物鏡）細胞密度和細胞間相互作用的特征。
5）在中倍率（10X物鏡）和高倍率（20X物鏡）物鏡下觀察細胞的健康狀態（圖13.1)，聚攏的特征，單層細胞的收縮或分開。
6）觀察有無污染的特征（圖19.la~c）。
7）尋找有絲分裂并粗略估計發生頻率。
8）給每一種培養物照相（見方案16.6)，注意培養物的細節（細胞類型，最后一次傳代的時間）和細胞密度，以及任何你感興趣的特殊特征．,
9）將培養物放回解箱．取新的培養物垂復以上步孩。
補充方案：染色（見方案16.2，方案16.3)；離心涂片（見方案16.4)．間接免疫熒光（見方案16.11）。
實驗變化
l）尋找相關培養物在生長模式、細胞密度和形態學方面的差異。
2）評估細胞的健康狀態。
3）有無污染的跡象？
4）細胞是否準備好換液（見13.6.2節）或傳代（見13.7.1節）?
5）通過計算20X物鏡視野的面積和計數每個視野中的細胞數來從化地估計細胞密度．如果使用數碼相機和監控器這就會變得很簡單，可以川薄膜扭蓋屏幕，用記號筆給每一個細胞做標記。
6）鑒別和計數這些高倍視野中處在有杖分裂，!，的細胞。
數據
定性
l）記錄所有培養物在形態學、外形和生長形式方面的觀察結果
2）注意任何污染物
3）確定健康狀態及其他
定量
l）記錄每一個培養物的細胞密度（細胞數 / cm2）。
2）記錄每一個培養物的有絲分裂指數。
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