動物的選擇與應用

動物的選擇與應用

　　（一）口服避孕藥物的篩選研究

　　目前國內外廣泛應用的口服避孕藥（孕激素與雌激素的復合片以及單純孕激素藥片）其避孕效果都非常好，但還存在一定副作用。為了提高口服避孕藥的可接受率，有必要尋找更加理想的、有效、安全、經濟、方便的藥物。

　　篩選口服避孕藥的實驗動物多使用嚙齒類實驗動物，因為它們具有規律的動情周期，排卵有明顯的指標，易于檢測，價格便宜，而具有月經周期的靈長類動物反而不是都被選擇的對象。因為這類動物來源困難，價格昂貴，排卵和月經周期難于檢測。

　　當動物實驗證實某藥物有抗生育的效果后，還必須進行各種藥理實驗。

　　1．孕激素活性測定　根據Mcphail的方法，以未成熟雌性家兔子宮內膜的變化為觀察指標；

　　2．妊娠維持實驗　一般選大鼠為動物模型；

　　3．雌激素活性及抗雌激素活性測定　用未成年或去卵巢未成熟大鼠為動物模型，以子宮稱重或陰道涂片為觀察指標；

　　4．雄激素活性及抗雄激素活性測定　用大鼠或小鼠為動物模型，以前列腺腹側及儲精囊稱重為觀察指標；

　　5．對促性腺激素分泌的影響　用嚙齒類或其它種類動物為實驗模型，以是否抑制排卵或測定外周血的促性腺激素含量為觀察指標；

　　6．蛻鎮痛形成實驗　用小鼠為動物模型；

　　7．糖皮質激素活性測定　用大量為動物模型。

　　以上7個為基本實驗，根據需要還可以增添其它實驗。

　　（二）避孕藥物的藥理研究

　　1． 女用避孕藥物　研究最基本方法是抗生育實驗，就是在與雄性動物合籠前和合籠交配期間，給雌性動物服藥，觀察藥物對生育的影響。以檢查雌性動物懷孕百分率和每只孕鼠之胚胎數為指標。如果能找到一種藥具有防止受精卵著床的作用或中斷早期妊娠的作用，那就不必天天服藥，而只在需要時服用。這是避孕藥研究工作者多年來的一項設想。常需要作抗著床和抗早孕實驗。抗著床實驗是將雌鼠與雄鼠合籠，每天上午檢查雌鼠陰道口有無陰栓，于出現陰栓后第1～5天，每日給藥一次，于陰栓出現后第12天處死動物，以胚胎數和懷孕百分率為指標。陰栓是某些嚙齒類動物在交配后，隨即形成的一種白色漿液性物質，堵塞在陰道至子宮頸的腔內，稱為陰栓（Vaginal plug）。是檢查動物已否交配的一種標志，將出現陰栓的當天算為妊娠“零天”。陰栓是由雄鼠精囊腺和凝固腺的分泌物在陰道內凝固而成的產物。小白鼠一般在交配后4～5分鐘內形成。大的陰栓可凸出于陰道口，小的陰道或子宮頸內，需要翻開陰道口才能查見。陰栓一般在交配后一小時起漸漸軟化，經16～24小時后脫落。但也有只存在4～5小時，而最多的可存在48小時以上。小鼠陰栓比較牢固，大鼠的陰栓不牢固，容易脫落，所以檢查大鼠陰栓時，除檢查陰道外，還應在籠底尋找陰栓。亦可用生理鹽水沖洗陰道，在顯微鏡下檢查沖洗液中有無精子，有精子表示已交配。抗早孕實驗是在著床（出現陰栓后第5天著床）以后給藥，一般于陰栓出現后第6～9天連續給藥4天，第12天處理，以檢查胚胎數和死胎為指標。抗生育、抗著床和抗早孕實驗中最常用的動物為壯年的28～35g的小鼠，也可用體重200～250體重的大鼠。在探討一個避孕藥的作用原理時，有時需要檢查一個藥物有沒有抑制排卵作用。需要進行抗排卵實驗，常選用體重2～3.5kg的雌兔進行實驗。

　　2．男用避孕藥物研究　長期以來，對男用避孕藥的研究不很重現，進展緩慢。藥物能抑制精子的生成過程，干擾男性生殖活動的激素調節；干擾副性腺和改變精液的理化特性等，均可達到不孕的目的。現在認為，精子形態的成熟是在睪丸，而生理的成熟是在副睪。藥物作用于副性腺，干擾精子成熟或改變精液理化性質所引起的男性不孕似較理想。常選用成年雄性大白鼠作實驗，如觀察藥物對大白鼠生育力的影響；對大白鼠精子數的影響；對大白鼠精子活動力的影響以及對雄性激素的作用等。

　　實驗中常需要采集實驗動物的精液，采集的方法有電刺激法、假陰道法、按摩法以及直接殺取法。電刺激法適用于多種實驗動物，尤其是野生實驗動物的采精，其原理是通過刺激輸卵管壺腹附近的神經末稍，引起低級射精中樞興奮而促使動物射精。所用電刺激采精器的主要技術參數為：電源電壓-交流220V；輸出可調電壓0～20V；可高頻率20～60Hz：輸出電流0～1000mA：輸出波形-正弦波或方波。假陰道法是用硬質外殼襯以膠質內胎制成的采精器械，內部注以溫水和充氣，適當加以潤滑，使其與雌性動物生殖道的內環境相似，以誘起雄性動物射精常，常適用于兔的采精。貓在有發情母貓引誘情況下，當公貓爬跨時，也可使用此法采精，但象水貂那樣在交配時雌雄動物長時間緊密擁抱的動物，無法使用假陰道。按摩法主要用于狗的采精，這是因為狗在交配時，雄狗陰莖的球狀海綿體充血脹大并和雌狗的陰道鎖結，采取假陰道法采精有一定困難，故多采用按摩法。狗的射精分為3段，前段為尿道腺的分泌物，約為0.25～2.0ml的透明液體：中段排出的是濃精，約0.5～3.0ml；第3段則為大量透明的前列腺分泌物，量可達3～20ml，但幾乎不含精子。按摩法對于調教好的雄狗方便易行，并可存細胞觀察射精情況，收集所需部分，無需特殊設備。但不能用于野生犬科或陌生猛犬。直接殺取法適于前面幾種方法不適用時采用，如小白鼠、水貂等，系將動物處死，取其輸卵管和附睪丸，用生理鹽水或其它專門稀釋液沖洗，制成精子懸浮液備用。常用實驗動物采精方法和精液特點見表10-47。

表10-47　各種動物精液采取方法和精液特點

　　（三）中樞神經系統對促性腺激素分泌的調節作用研究

　　不同動物的中樞神經系統對垂體促性腺激素分泌的調節是有很大差異的。如靈長類和大鼠的垂體以同樣的方式對促黃體素釋放激素起反應，并以同樣的形式被大劑量雌激素或雄激素所抑制。這兩種動物的中樞神經系統，在自發性排卵中都是必不可少的,這是它們的共同點。但調節大鼠促性腺激素釋放的中樞是視前結節系統，若視前區受損，則在排卵前雌激素不能導致促黃體激素的釋放。而這一區域受損不影響恒河猴促黃體激素的釋放，因為恒河猴促性腺素釋放的調節中樞是結節漏頭斗狀系統，這是它們的不同點。

　　在中樞神經系統對促性腺激素調節的研究中，大鼠是常用的動物模型，因這方面已積累了大量的有關研究資料：價格便宜，易于飼養，有規律的性周期便于檢測，且周期短，易于安排實驗，排卵前有自發的LH峰，所得的結果一般易于在猴子身上得到重復。

　　陰道涂片可以準確地判斷大鼠和小鼠動情周期的各個階段，從而可推測排卵前LH峰及排卵，但此方法很少用