動脈的基因轉移實驗

實驗材料 幼年家豬性別任意病毒或非病毒的包含編碼重組基因的載體

試劑、試劑盒 阿斯匹林Telazol甲苯噻嗪異氟烷無菌的磷酸鹽緩沖溶液

儀器、耗材 導管（適合豬用的）和器械標準的手術器械Balfour牽引器絲帶兩個氣囊導管壓力牽引器血液動力監護儀可吸收的縫線皮膚鎖環

實驗步驟

1.在手術前 2 天，給幼年家豬按 10mg/kg 體重的劑量服用阿斯匹林，并且在整個研究過程中每周一次連續服用 3 次。

2.按每公斤 6.0 mg Teiazol 和 2.2 mg 甲苯噻嗪（Xylazine) 的量給家豬進行肌肉注射來麻醉，然后插人一根導管，用異氟烷（isofhrane) 來麻醉，直到整個手術完成。

3.將實驗用的家豬準備好，然后用一塊布將其蓋住，劃一條中位線，從它的腹部切開，一直延伸到恥骨。就這樣，把豬的表皮和筋膜沿中線切開了。如果是母豬的話，要避免切到它的尿道。從中打開一個空洞，小心地使用牽引器將它的腸放入體內。

4.用各種各樣的器械，將從其頭蓋骨附近到大腿骨的的動脈血管分離出來。小心地將血管附近的淋巴和附近黏附的組織分開。從水平的角度將血管分離，以避免切到旁邊的支血管。

5.小心分離后，用 2-0 的絲線將分支血管綁好。如果不這樣的話，會降低血管中的血壓，以至于影響到基因的轉移。

6.把髂骨的尾部用 2-0 的絲繩綁好，用一把精致的剪刀在髂骨的動脈切一個口子，小心地用剪刀將血管擴張，插入一對氣囊導管（圖 13.1.1)。

>第 7~9 步是為了誘導血管手術的進行，如果是轉基因到普通的血管，直接跳到第 10 步

7.通過目視鏡，進一步地將導管接近氣囊的尾部。這個操作需要通過微小的牽引將導管變直。

8.把管內無菌 PBS 裝在壓力轉換器中，將它的壓力調為0并且與球的尾部相連接。按 lcc/1~5 min 的速率在球中不斷地充氣（緩慢的充氣是為了保護受傷的地方。這時壓力表的壓力大約為 500 mmHg。

9.導管的中部，兩個氣囊跨過受傷的血管的地方，將導管慢慢地縮小。

10.在氣囊的尾部充人 1cc 的空氣，加人 3~5 ml 的無菌 PBS，將血液沖走。

11.在導管（0.8 ml) 中加滿病毒或非病毒的載體液體或者轉入基因的細胞混懸液。

12.在氣囊中充入 Iml 的空氣。

13.在兩個氣囊之間（0.1~0.3 ml) 血管的傷口處的區域滴滿懸液，測量滴入時的壓力，不要超過 150 mmHg(豬的血壓是 901 mmHg)。整個滴入過程為 20 min，其間要控制住壓力。

14.從近到遠，對氣囊放氣。把導管移開，并用 2-0 的絲繩綁好髂骨的動脈。確保血液的流動正常。

15.用 1-0 可吸收的縫線將豬的血管和肌肉縫合，再將筋膜縫合，最后將表皮縫合。