1．半抗原與載體連接時，應選擇合適的方法，結合方式的選擇應考慮如下因素：
1）半抗原的溶解度和穩定性：在結合反應中應不導致半抗原活性的改變，同時也不能使載體變性至不溶解的程度。
2）結合鍵的位置：抗體對遠離蛋白質聯接點的半抗原部分有最好的特異性，故聯接時應使聯接鍵遠離半抗原的決定簇。
3）選擇適合的偶聯試劑：不同的半抗原在偶聯時，應根據半抗原的化學結構，以及反應方式選擇適當的偶聯試劑。如小分子肽類有一定的三級結構，在溶液中依靠氨基酸殘基來維持其結構的穩定。因此，用雙功能的亞氨酸酯不但對氨基酸有選擇，而且能代替被取代的每一個ε-氨基的正電荷。蛋白質與偶聯劑接觸后，使不同蛋白質分子的功能基團交聯并凝聚。廣泛交聯的蛋白質，其溶解度常降低，而這種溶解度差的蛋白質卻是有效的免疫源。
2．連接方法半抗原與載體的連接通常可用物理和化學方法進行。物理吸附的載體有羧甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮等，它們借電荷和微孔吸附半抗原。化學法則是利用某些功能基團把半抗原連接到載體上，這些載體包括血清白蛋白、甲狀腺球蛋白、銅藍蛋白、卵蛋白和人工合成的多聚賴氨酸。帶有游離氨基或游離羧基以及兩種基團都有的半抗原，可直接與載體連接。其他不帶有氨基或羧基的半抗原，須加以適當的改造，使其轉變為帶有游離氨基或游離羧基的衍生物，才能與載體連接。
1 有游離氨基或游離羧基以及兩種基團都有的半抗原與載體的連接方法
（1）碳化二亞胺法：碳化二亞胺是一種化學性質非常活躍的雙功能試劑，它們既可與半抗原上的羧基又可與半抗原上的氨基縮合。此法非常簡便，只要將半抗原與載體蛋白質按一定分子比混合在適當的溶液中，然后加入碳二亞胺，攪拌l～2h，置室溫反應24h，最后透析除去未反應的半抗原，即可得到人工免疫原。
（2）戊二醛法：戍二醛是帶有兩個活性基團雙功能的連結劑，它借助兩端的醛基與載體和半抗原的氨基以共價鍵連接，其反應如下：
（3）混和酸酐法：混合酸酐法又稱為氯甲基異丁酯法，主要用以甾體激素與蛋白質的偶連。以烷基氯甲基為偶連劑，最常用的是氯甲基異丁酯。含有羧基的半抗原與氯甲基異丁酯反應形成混合酸酐，然后在與蛋白質載體上的氨基反應形成肽鍵。其反應如下：
（4）過碘酸氧化法：過碘酸將糖環氧化成雙醛基，再與蛋白質上的氨基偶聯。本法常用于配糖體類藥物與蛋白質的偶聯。
2 帶有氨基或羧基的半抗原可用下面方法改造后，再用上述方法進行連接
（1） 琥珀酸酐法：本法用于帶有羥基的半抗原的改造。琥珀酸酐加水轉變成琥珀酸。如將帶有羥基的半抗原和琥珀酸酐在無水吡啶中反應，即可得到帶有羧基的半抗原琥珀酸的衍生物。其反應式如下：
（2） 羧甲基羥胺法：帶有酮基的半抗原（如孕酮、睪酮）與O-(羧甲基)羥胺反應，轉變為帶有羧基的半抗原衍生物。其反應式如下：
（3）重氮化的對氨基苯甲酸法：本法適于帶有酚基的半抗原（如某些藥物）的改造。先將對氨基苯甲酸和亞硝酸鈉反應，反應產物再作用于帶有酚基的半抗原，從而制得帶有羧基的半抗原衍生物。
（4）一氯醋酸鈉：本法適于帶有酚基半抗原的改造。將帶有酚基的藥物與一氯醋酸鈉反應即可得到帶有羧基的半抗原衍生物。