單克隆抗體細胞的選擇

實驗概要

本文介紹了單克隆抗體細胞的選擇實驗。

實驗原理

在體外的細胞培養中，單個的或數量很少的細胞不易生存與繁殖，必須加入其它活的細胞才能使其生長繁殖，加入的細胞稱之為飼養細胞(Feeder cell)。在細胞融合和單克隆的選擇過程中，就是在少量的或單個細胞的基礎上使其生長繁殖成群體，因此在這一過程中必須使用飼養細胞。許多種類的動物細胞都可以做飼養細胞，如正常的脾細胞、胸腺細胞、腹腔滲出細胞等，常選用腹腔滲出細胞，其中主要是巨噬細胞和淋巴細胞。應用腹腔滲出細胞的好處是：一方面做飼養細胞，另一方面巨噬細胞可以吞噬死亡的細胞和細胞碎片，為融合細胞的生長造成良好的環境。腹腔細胞的來源可以是與骨髓瘤細胞同系鼠。也可以是其他種類的小鼠，如C₅₇鼠，昆明小白鼠等。

實驗步驟

脾細胞：

1. 材料

   1) 免疫過的血清抗體滴度高的Balb/c鼠。

   2) 1640培養液。

   3) 2.5％FCS－1640營養液。

2. 操作方法

   1) 拉頸或用CO₂處死小白鼠。

   2) 將小鼠放于70％酒精中浸泡消毒，取出固定于板上，在無菌條件下取脾。

   3) 把脾放入5ml含有2.5％FCS的1640液中，冰浴下輕輕洗去脾上的紅血球。

   4) 用鑷子輕輕擠壓脾，做成脾細胞懸液，用毛細管將懸液移入小試管中。

   5) 直立小試管3min，使大塊的結締組織下沉，把細胞懸液移入離心管中。

   6) 以2.5％FCS—1640充滿離心管，并以400g離心7min～10min(與此同時應開始制備骨髓細胞)。

   7) 把沉淀用約10ml的新鮮培養液再懸浮。

   8) 重復6、7步驟。

   9) 計算細胞，以臺盼蘭染色用相差顯微鏡檢查，活細胞數應高于80％為合格。

飼養細胞：

1. 材料

   1) 小鼠(Balb/c或C₅₇小白鼠)若干只。

   2) 11.6％蔗糖溶液(經10磅30min高壓滅菌)。

2. 操作方法

   1) 拉頸處死小鼠。

   2) 70％酒精浸泡消毒10min。

   3) 用手術剪將小鼠腹部剪開一小口，剝開皮膚，露出腹腔。

   4) 用注射器將4ml 11.6％蔗糖溶液注入腹腔，用手指輕揉1min仍用該注射器回抽腹腔液體，加入離心管。

   5) 1000r／min離心10min。

   6) 取上清，以HAT選擇培養液將細胞制成懸液。臺盼藍染色計數活細胞，使每毫升含40萬個活細胞。

   7) 以1ml吸管將細胞種入微量培養皿，每孔0.05ml，含2萬個細胞，放入CO₂培養箱培養，即可供細胞融合和克隆化之用。如果在融合后發現在培養孔中飼養細胞數量少，則可以在細胞換液時再加入一些。