實驗材料 雜交瘤細胞
試劑、試劑盒 完全DMEM-10HEPES丙酮酸鈉PBS
儀器、耗材 注射針頭離心管轉子離心機
實驗步驟
1. 用20G或22G的注射針，小鼠腹膜內注射降植烷，每只鼠0.5 ~ 1 ml，1周后接種細胞。
2. 在175 cm2培養瓶中加完全DMEM-10/HEPES/丙酮酸鈉培養液，進行雜交瘤細胞的培養，使細胞生長至對數期。
3. 將培養液轉入50 ml 錐形離心管中，室溫下500 g 離心5 min。
4. 細胞重懸于50 ml 無菌的PBS或HBSS（不含FBS）中洗滌。然后室溫下500 g 離心5 min，棄上清。重復2次，然后細胞重懸于5 ml 的PBS或HBSS中。
5. 計數細胞，通過臺盼藍染色法確定細胞活力。
6. 用不含FBS的HBSS或PBS調整細胞濃度至2.5×102細胞/ml。
7. 用一個10 ml 的無菌的帶22G針頭的注射器，對裸鼠進行腹膜內注射2 ml 細胞，等待腹水形成（1~2周）。
8. 收獲腹水。
（1）一只手抓住并固定小鼠，使其腹部皮膚繃緊。
（2）另一只手將一只18G的計頭插入小鼠腹腔1~2 cm 深。
（3）進針部位為左下腹或右下腹，以避免刺入鼠上腹部的重要器官，以及腹中線處的主要大血管。
（4）令腹水滴入一只無菌的15 ml 聚丙烯錐形離心管中。
9. 于室溫下，1 500 g 離心腹水10 min，收集上清，棄沉淀，將腹水存放于4℃，直到收集腹水的工作完成（在1周內）。
10. 再次收獲腹水前，讓小鼠再次積累腹水（2~3天），具體操作同步驟8，腹水的加工處理操作同步驟9。重復這個過程直到再沒有腹水產生可供收集，或者小鼠健康狀況不佳。此時，可處死小鼠
11. 把在幾天內收集到的腹水匯集到一起，于56℃水浴45 min 進行熱處理，如果凝塊形成，可參照步驟9中方法去除之，然后再離心。
12. 采用適當的方法檢測腹水中的MAb的滴度。
13. 按大于1：10的比例稀釋MAb，并進行濾過除菌，濾膜孔徑為0.45 μm，分裝并凍存于-70℃，避免反復凍融，可凍存數年之久。