病毒分離培養是當今臨床上明確診斷皰疹病毒感染的可靠依據。可采集皮膚、生殖器等病變部位的水皰液、腦脊液、角膜刮取物、唾液等標本,接種人二倍體成纖維細胞株WI38及其它傳代細胞株如Vero、BHK等,經24~48小時后,細胞則出現腫脹、變圓、細胞融合等病變。然后用HSV-1和HSV-2的單克隆抗體作免疫熒光染色鑒定或應用DNA限制性內切酶圖譜分析來定型。