單克隆抗體的制備——雜交瘤培養上清的篩選分析

附 加 材 料（其他材料見基本方案 2)

在 9 6 孔板中生長的雜交瘤（見基本方案 2)

添 加 10 mmol/L HEPES的 DMEM-2 0 完 全 培 養 基（附 錄 1)

多道移液器和9 6 孔板，可選的

1.在倒置顯微鏡下觀察生長的雜交瘤的孔數。確定是對所有孔進行細胞篩選還是只篩選長有雜交瘤的孔。

2.將生長的雜交瘤在CO2 培養箱中培養≥ 2 d，以使抗體達到飽和滴度。

3.用微量移液器從每個孔中取IOOmI 培養上清用于檢測或篩選分析，如 ELISA (單元1.1 ) 或間接免疫熒光法（單 元 4.1)。 每操作一個孔需更換新的槍頭。如果是對所有孔進行細胞篩選，使用多道移液器可以方便地將培養上清移入另一個 9 6 孔板中。注意保持樣品的順序一致，行 、列標簽明確。如需對大量樣本進行篩選，可以將幾個孔的樣品合并入一個孔。一般情況下，檢測結果中只有小于 1 % ?5 % 的雜交瘤可以表達具有所需特異性的抗體（此時的抗體還不是單克隆抗體）。

4.當完成一整塊孔板的取樣后，用 新 鮮 的 添 加HEPES的 DMEM-20完全培養基培養液填滿孔板，再對下一塊孔板進行操作（見基本方案 2 , 步 驟 23)。