原代細胞培養小鼠胚胎分離實驗

原代細胞培養，是指直接從動物體內獲取的細胞、組織或器官，在體外培養，直到第一次傳代為止。這種培養，首先用無菌操作的方法，從動物體內取出所需的組織（或器官），經胰酶消化，分散成為單個游離的細胞，在人工條件下培養，使其不斷地生長及繁殖。

懷孕母鼠

培養液 血清 平衡鹽溶液 抗生素 HEPES緩沖液

超凈工作臺 濾器 CO2培養箱 電熱干燥箱 培養皿 培養瓶 滴管 鑷子 手術剪

1. 取材：取懷孕母鼠，頸椎脫臼法處死后，整個鼠體侵入盛有純酒精的燒杯中浸泡1分鐘。取出母鼠在不銹鋼手術盤中用無菌手術剪打開腹腔，取出鼠胚，放入無菌培養皿內。注意取材可在無菌操作臺外操作。

2. 用70%酒精擦拭裝有鼠胚的培養皿外周后，將培養皿移至超凈工作臺上，用含雙抗的Hanks液洗滌鼠胚數遍去除血污。用無菌手術器械去除頭、尾和四肢及內臟，余下組織用剪刀剪碎后，再用含雙抗的Hanks液洗滌數次。最后用含血清的細胞培養液清洗。

3. 把組織塊剪成1 mm³左右大小于培養液中，用無菌膠頭吸管吸取組織塊，注意要吸在專用的細胞長吸管前端細長部位，如吸得過高，可使組織小塊黏附于管壁而無法吹出。組織塊應均勻貼附于細胞培養瓶的底部，注意組織塊間要留有空間，不要太密。

4. 翻轉培養瓶，使貼附組織塊的細胞培養面朝上，在培養瓶底加入細胞培養液3——5ml，不要加的太多以免培養液漏出產生污染。旋好瓶蓋后在培養瓶側用油性筆寫上培養時間。細胞培養放于CO2恒溫培養箱中，溫度為37℃，CO2濃度為5%，完全濕度條件下進行培養，以利組織塊貼附。

5. 2-3小時后，可見組織小塊略干燥，牢固貼在瓶壁時，再慢慢翻轉培養瓶，使細胞培養液緩慢浸泡組織塊，繼續培養。操作過程中，動作一定要輕緩，以免貼附在瓶壁上的組織塊脫落，影響貼壁培養。然后將培養瓶置于37℃培養箱培養2-3天。

1. 培養液和培養物的比例：一定濃度的培養物僅能支持一定數量的細胞生長，不能盲目增加每單位體積的細胞濃度。

2. pH：初培養pH應為7.4，培養過程中應不低于7.0。

3. 培養瓶內的空間：一般培養瓶內培養液與液面上的空間體積之比為1:10。