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  • 發布時間:2020-07-13 16:39 原文鏈接: 原代細胞富爾根(Feulgen)反應顯示DNA

    原代細胞富爾根(Feulgen)反應顯示DNA

     

    基本原理:

    顯示DNA的傳統方法是富爾根(Feulgen)反應,切片先用稀鹽酸處理,DNA經弱酸(1mol/L HCL)水解后,在60℃條件下使DNA分子中脫氧核糖與嘌呤之間的連接打開,脫氧核糖的一端釋放出醛基,并在原位與Schiff試劑反應生成紫紅色產物。原理同PAS反應,使細胞核DNA顯紫紅色。在此過程中RNA不受影響,故染色具有DNA特異性。準確的溫度和鹽酸濃度,適宜的水解時間是成功的關鍵。水解過度或不足均降低染色強度。

     

    配制試劑:

    1.    1mol/L HCL:將8.5ml濃鹽酸和91.5ml蒸餾水混合即得;

    2.    0.5%亮綠水溶液;

     

    染色步驟:

    1.    取培養于蓋玻片上的貼壁原代細胞,用Hanks液漂洗三次;

    2.    在卡諾(Carnoy)固定液中固定10min,然后蒸餾水洗三次;

    3.    移入60℃濃度為1mol/L的HCL中靜置10min;

    4.    用蒸餾水漂洗幾次;

    5.    放入Schiff試劑中靜置30—60min,可隨時檢查顯色情況;

    6.    用自來水沖洗5min;

    7.    再用蒸餾水漂洗;

    8.    不同濃度梯度乙醇溶液脫水;

    9.    用二甲苯透明、樹膠封片;

     

    結果:

    原代細胞核內DNA顯紫紅色,細胞質呈綠色;


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